外泌体是属于体里的血细胞外囊泡。专门是在粘液活组织化查检中，如血浆、脑脊液、吐沫、尿水、母乳等。鸟卵的数值一般来说为40-100nm，是体里世界上最大的囊泡。 

外泌体的结构：

• 外泌体有个包含从外面淀粉酶酶酶的磷脂双团伙层。这么多淀粉酶酶酶质会不光滑地具有于全部的的外泌体中，或表明外泌体脱离的区域而特殊具有。这么多从外面淀粉酶酶酶有似：CD63，CD9，Alix。
• 外泌体分为膳食纤维质、RNA和microRNA，时不时也分为DNA。

 

 

外泌体的应用：外泌体在体内有特定的应用，但也可用于其他临床目的。它们可用于：

（1）免疫抗体调高；（2）策划 复苏；（3）确诊；（4）生物体标记图片物得知；（5）DNA缓解。

 

外泌体纯化：有多种方法可以纯化外泌体。这些方法包括差速离心（differential centrifugation）、密度梯度超速离心（density-gradient ultracentrifugation）、尺寸排阻（size exclusion）、磁激活（magnetics activated）、基于polymer（polymeꦛr-based）、免疫学方法（immunological methods）和微流体（microfluidics）。

 

痛点：

• 在这其中几个纯化方式如果不是特男人的，担心这些共同利益纯化外泌体和任何内部外囊泡。 这意思着当在拆迁中遇到到外泌体内的容物的纯化时，内部外囊泡的网站内容物也将被纯化。

列举，如果外泌体发展中含凋亡小体，则凋亡小体中其含的DNA也会随着时间的推移外泌体的RNA、microRNA和核苷酸质內容物一起去被纯化。这将会会欺骗内在的讲解。

• 某些工艺中的基本都数都要消费过多的时。

随后，源于polymer的工艺应该隔夜孵育期。

• 这之中的有一些技术的低通量规定了样表量，并结果是规定了外泌体的齐全性或产量比。
• 在这当中的这些步骤要在泌体纯化事先开展预清理，、唯一性的实验仪器。

 

Norgen用于外泌体纯化的SiC技术：该纯化技术通过调节样品的pH值来改变外泌体表面蛋白的电荷，使其与碳化硅技术结合。

 

欧宝体育官方 科技作为专业的生命科学领域解决方案供应商，为您推荐独家代理欧宝体育官方:Norgen Biotek品牌的各种外泌体纯化试剂盒。操作快速、灵敏、特异，允许高通量，不需要特殊的仪器或预处理。欧宝体育官方 仅限用于科研学术研究用途，不得用于医疗与诊断。

欧宝体育官方 名称及描述	货号	上样量范围
Plasma/Serum Exosome Purification and RNA Isolation Mini Kit	58300	50 ?L - 1 mL
Plasma/Serum Exosome Purification and RNA Isolation Midi Kit	58500	1 mL - 4 mL
Plasma/Serum Exosome Purification and RNA Isolation Maxi Kit	58600	4 mL - 10 mL
Urine Exosome Purification and RNA Isolation Mini Kit	58400	250 ?L - 1 mL
Urine Exosome Purification and RNA Isolation Midi Kit	58700	2 mL - 10 mL
Urine Exosome Purification and RNA Isolation Maxi Kit	58800	11 mL - 30 mL
Cell Culture Media Exosome Purification and RNA Isolation Mini Kit	60700	5 mL - 10 mL
Cell Culture Media Exosome Purification and RNA Isolation Midi Kit	60800	10 mL - 20 mL
Cell Culture Media Exosome Purification and RNA Isolation Maxi Kit	60900	20 mL - 35 mL
Saliva Exosome Purification Kit	65300	Up to 2 mL

 

Norgen试剂盒的方法原理：

（1）将获取 ExoC buffer 来进行调节合格品的pH值，于是转变外泌躯干部面淀粉酶质的电势。（2）否则 SiC slurry E 被引入到样件中，改善的的表面核蛋白将组合到 SiC 上并组成沉积粉末。（3）可能核高淀粉酶酶综合的 RNA 也会与 SiC 综合，下两步将从SiC和核高淀粉酶酶综合的RNA中分发型离外泌体。 ExoR buffer将被注入奠定颗粒剂中，并再度呈现外泌体面核淀粉酶酶。（4）外泌体将从 SiC 中解发粗来，上清液上将涉及到纯化的外泌体。 

Norgen的SiC技术用于从外泌体中纯化RNA：

（1）已经外泌体被纯化，外泌体的介绍物就能够被是用来探索了。

（2）Norgen的RNA纯化试剂盒也使用SiC技术：

      ①不使用苯酚或氯仿（他们有高度毒性和影响下游分析）；

②灵敏度高，意味着不需要载体RNA（这又会影响下游处理，如测序）；

③没有大小偏差或GC含量偏差（独特的）。

（3）注意：可能RNA的ꦕ氨水浓度较低，故此选用bioanalyzer（低至50 pg）或Norgen自个的参考值分析微生物培养基盒（低至𝔍1 pg）实施RNA参考值分析是太重要的，可能因此的检查测量限很低。

会因为缺乏性核糖体RNA，这样RIN值和260:280比率不是用。

 

额外补充的要点：

（1）在纯化外泌体和RNA角度如果没有超过预期收益的生产油量。生产油量相互影响是不小；它决定于于上皮细胞的可溶性、绿色的现象、年岭等。RNA生产油量一样 在1-100 pg/μL规模内。

（2）Norgen试剂盒可以从新鲜或冷冻样品中纯化外泌体。但是，如果您要使用冷冻样品，不要去除样品中形成的蛋白质沉淀物这点很重要，因为它会含有外泌体。

（3）优秀文章鉴赏：Human myeloma cell- and plasma-derived extracellular vesicles contribute to functional regulation of stromal cells. Proteomics. 2021 (当您对使用Norgen试剂盒纯化的外泌体用于蛋白质组学有疑问时，请𓆏参考这篇文章。本文展示了正确的分析方法，并证明从Norgen试剂盒中纯化的外泌体可用于蛋白质印迹、质谱、纳米颗粒和电子显微镜检查。)

该稿件DOI: 10.1002/pmic.202000119 

Tips：低丰度RNA的定量

（1）无发运用NanoDrop实现降钙素原检测。所需另外步骤。

（2）请参阅Application Note 47 - Revised Guidelines for RNA Quality Assessment for Diverse Biological Samꦬple Input.

 

 

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