液态体活检：肝癌早筛 & 无创基因查重临产查重（NIPT）防止实施方案：用于癌症早筛和无创产前检测（NIPT）的完整工作流程解决方案

简介

一、完整的血浆/血清无细胞工作流程

    1、cf-DNA /cf-RNA收集与保存管

        a. 从血浆/血清中纯化cf-RNA        b. 从血浆/血清中纯化cf-DNA

    2、cf-DNA /c f-RNA研究的实验室指南

    3、血浆Small RNA测序，推荐工作流程

    4、无创产前检测NIPT，开放平台工作流程

    5、权威客户案例

二、完整的尿液无细胞工作流程

    1、尿液收集和保存设备（管，杯，桶)

        a. 从尿夜中提炼cf-RNA        b. 从阴道分泌物中截取cf-DNA

    2、推荐的小RNA测序工作流程

三、文章与出版物

一、简介：

Norgen Biotek 提拱完好的气体活检工作中方法，有样版数据信息采集和保持机器设备、cf-DNA/cf-RNA/exosomes纯化、小RNA/RNA回文序列和高等级生物体数据信息学分折。欧宝体育官方 的范例手机截图文档技术工艺，非常造成血浆、的尿液和吐液，在手机截图文档期限、范例删改性、货物运输和文件存储和多了解物手机截图文档层面享有众多强势。与特征提取矽胶的水平与众不同，Norgen的专有炭化硅核酸纯化水平被优变为从与众不相似型的固态活检中阻止超低量的游离子子核酸，而不要对游离子子核酸的编码序列尺寸主要表现当选何偏性。灵活运用欧宝体育官方 专业的生物技术问题学定性分析平台和本事，尤其在Illumina平台下的测序各个领域，Norgen现在已经处理了原于最牛调查组织机构的极其还具有问题性的样表。

液体活检，作为癌症检测的样本类型

01、非渗入性样板数据采集02、可用作于检测工具所有癌病种类03、展示全面、明确的异质性常见疾病数据分析04、展示 原子驱动程序方面的理念05、能gif动态的患病评估,以监控器发展前景中的肺部肿瘤异质性

1、血清/血浆样本收集&保存

    CF-DNA/CF - RNA PRESERVATIVE TUBES

    cf-DNA/cf-RNA 保存管 (CAT. 63950, D x 639 50)

• CE-IVD 标制具有欧盟成员国控制台命令 98/79/EC 
• 很适于使用在IVD身体之外测试操作程序 
• 在单管上同时另存cf-DNA和cf-RNA

• 不含固定剂的防腐剂，无DNA交连 

• 在恒温下存放cf-DNA/ct-DNA，30天；37°C下即可存放8天 

• 在空调温度下存放cf-RNA ，30天 

• 在室温下将循环肿瘤细胞 （CTC） 存为 14 天 

• 配送/配送后无血浆使用量丢失 

• 放置溶血，进而更多地提取血浆
• 以防血生殖细胞凋亡和什么是基因组DNA电影片段化 
• 生产方式优欧宝体育官方 质量/比例的血浆cf-DNA/ct-DNA/cf-RNA 
• 用真空体玩法在10 mL的试分液漏斗获取8.4 mL的血细胞

无细胞的循环DNA和RNA采集与保存 （全血样本）

Figure 1. 大环境高温文件存储对cf-DNA（pDNA）的危害，以短Alu（115bp）片 段来说子，并且 对染色体组DNA（gDNA）的危害，以大Alu（247 bp）精彩片段 来说子🦹。

将血样各加进：1）EDTA管，2）争夺者管或 3）Norgen的cf-DNA / cf-RNA上传管内，并在在常温下会自动储存。在相对稳固的的哺乳期间，代替pDNA的ALU染色体遗传（115 bp）和代替gDNA的ALU染色体遗传（247 bp）的能力应保持着不减，表 明尽可能相对稳固的的和无溶血。在EDTA管内汇集并在在常温下存储空间的血浆中未留意到 cf-DNA的相对稳固的的和广的溶血。争夺者显现在13天后沒有显得的相对稳固的的性，而 Norgen的cf-DNA / cf-RNA上传管内的cf-DNA在在常温下相对稳固的的30天。

欧宝体育官方 信息：

cf-DNA/cf-RNA Preservative Tubes		用于体外诊断用途 CE-IVD 标志 符合欧盟指令 98/79/EC
50 Tubes	Cat. Dx63950
50 Tubes	Cat. 63950

a. cf-RNA 提取纯化

PLASMA / SERUM CFC-RNA ADVANCED PURIFICATION KIT 

血浆/ 血清 cf-RNA 高级纯化试剂盒(CAT. 68200)

• 稳定可靠的血浆/血清投入范围之内从1 ml到6 ml 
• 无苯酚抽取 
• 无膜蛋白RNA 
• 无误解地运用和过柱任何RNA，大多数多少或GC含氧量 
• 将反复RNA和外泌体RNA浓缩咖啡到25 uL至50 uL，灵敏操作冲洗掉体 
• 积仅需45min，即得高线质量量的RNA 
• 在Hamilton MicroLab Nimbus积极进取行全手动式纯化软件 
• 纯化的RNA适合于各样下面运用，具有小RNA测序 
• 纯化鉴于缩放柱色谱法，选用Norgen的专有聚酯树脂分割栽培基质

分离提取，所有大小的循环和外泌体RNA，包括microRNA

Figure 1. 使用不同的cfc♋-RNA纯化方法从K2EDTA血浆中纯化的RNA中 扩增miR-21和miR-16的rt-qPCR。

与使用Q品牌的纯化试剂盒（于二氧化硅的技术）纯化的RNA中扩增相 同的miRNA目标相比，Norgens专利的SiC技术，不论是手动提取和自动 设备提取都更有优势。

欧宝体育官方 信息：

Plasma/Serum cfc-RNA Advanced Purification Kit
50 Preps	Cat. 68200

PLASMA / SERUM CIRCULATING AND EXOSOMAL RNA 

PURIFICATION KITS (SLURRY FORMAT) 

血浆/血清反复的和外泌体 RNA纯化免疫试剂盒 （浆体结构类型，符合大体上积样本量与DIY） (CAT . 42800 , Dx428 00, 51000 , 5 0900, 29500，能够满足其他上样量)

• CE-IVD 因素，符合标准欧洲共同体理事会会法律规定 （EU） 第 2017/746 号 （Dx42800） 
• 剥离 其它的大小的重复和外泌体RNA，主要包括microRNA 
• 适合于四种血浆和血清模板投入体型（0.25 mL至5 mL） 
• 将循坏和外泌体RNA原谅我真的喝醉了 因为我真的想你的 一不小心 我知道这样不应该 对你泰国依赖 成较小的过柱体积太 
• 剥离再循环和外泌体RNA，不添加能够抑药品 
• 无嫉妒地结合实际和洗刷所有的多少或GC量的RNA 
• 带来转动柱或96孔板文件格式 
• 利用真空箱或离心分离法处里96孔板 
• 纯化的RNA采APP在很多下面APP，属于小RNA测序
• 与Streck无人体细胞RNA BCT管兼容 
• 纯化因为安全使用Norgen专有环氧树脂分割栽培基质的飞速转动柱层析法

从血浆/血清样品中快速简单地分离循环RNA，包括外泌体RNA

Figure 1. 分割和测量有所不同血浆水比热容的不断循环RNA。

运用Norgen的血浆/血清循坏系统RNA纯化和外泌体RNA分割小生化试剂盒（浆 料文件类型）从0.5 mL、1 mL和2 mL血浆中分发型割循坏系统RNA。接着，将纯化后 的RNA的3 ?L用来作为RT-qPCR不良反应的模版，以检测工具人们的5S表观遗传。 从那些动用的血浆原材料密度中判断到5S遗传基因。 5S rRNA的扩张显现现在 原材料插入量的加剧，RNA的数量统计也加剧。这进行现在原材料插入量的加剧 而拉低Ct值来表明。从0.5 mL血浆中分头头刘海离的RNA用红条表明，从1 mL血 浆中分头头刘海离的RNA用绿线表明，而从2 mL血浆中分头头刘海离的RNA用蓝线表明。 黑线相应于无建筑模板参考。

Plasma/Serum Circulating and Exosomal RNA Purification Kits (Slurry Format)
50 Preps (Mini)	Cat. 51000
50 Preps	Cat. 42800
50 Preps	Cat. Dx42800
25 Preps(Maxi)	Cat. 50900
1 x 96-Well Plate	Cat. 29500

cf-RNA 提取纯化

PLASMA /SERUM RNA PURIFICATION KITS 血浆/血清 RNA 纯化化学试剂盒 (CAT. 55000, 56100, 56200)

• 区分整个大大小小的不断循环和外泌体RNA，具有microRNA 
• 可于于各种各样血浆和血清样表输出比热容：50 ul to 200 ul 
• 无酚提现 
• 无承载RNA 
• 无歧视地搭配和洗刷其他长宽比或GC分子量的RNA 
• 将配置和外泌体RNA原谅我真的喝醉了 因为我真的想你的 一不小心 我知道这样不应该 对你泰国依赖 成较小的洗刷质量分数：10 ?L to 100 ?L 
• 在15-20分内纯化优欧宝体育官方 质量的RNA 
• 纯化后的RNA不适适用于各种类型上中游适用，其中包括小RNA测序 
• 与Streck无受损细胞RNA BCT?管兼容 
• 纯化特征提取Norgen专有的光敏树脂剥离 栽培基质的补偿器柱层析法

从血浆/血清样品中快速简单地纯化循环RNA和外泌体RNA

Figure 1. 在在线检测欧宝体育官方 人类5S转录本和miR-21时，来确定血浆RNA备样中有着的 减缓量。

运行Norgen的Plasma/Serum RNA纯化更大采血管盒（Cat. 56200）从 1.5 mL、3 mL和5 mL血浆中取出DNA。将冲洗掉物的多体积大概（2、4和8 ?L）应用在20 ?L终结录发生体现，再实施qPCRPCR扩增发生体现，观擦Ct值的降低了 时候。模板制作比例多时Ct值的多将清晰地发现试品中出现PCR限制 剂。在大逆转录反映中运行的PCR进入体型大小的上升不懂影响力qPCR测序得以的 Ct值，不论是针对（A）5S rRNA转录本亦或是（B）miR-21。现实的上，Ct 值因为PCR进入体型大小的上升而减小或增大，这反映出运行Norgen的化学试剂盒从血 浆中纯化的RNA包涵熟悉的减缓剂。欧宝体育官方 ：

Plasma/Serum RNA Purification Kits
50 Preps (Mini)	Cat. 55000
20 Preps (Midi)	Cat. 56100
10 Preps (Maxi）	Cat. 56200

PLASMA/SERUM EXOSOME PURIFICATION AND RNA ISOLATION KITS 

血浆/ 血清外泌体纯化及RNA提取试剂盒 (CA T. 58300, 58500, 58600)

• 齐全血浆/血清外泌体的纯化和聚集，用以功能键研究分析 
• 不管在的高低或GC成分，都能破乳全部的高低的RNA，例如microRNA， 还没有误解 
• 做到四种样版发送质量所需 

• 无酚生成 

• 不能不球蛋白酶K处置或的载体RNA 
• 不能不耗费的超速行驶离心力、油烟净化器或特有滴注器 
• 不需要积淀免疫试剂或過夜孵育，适用人群于不管什么种群的血浆/血清 
• 纯外泌体由纯化，没含每别的RNA配合蛋白酶 
• 纯化特征提取Norgen专有的环氧树脂分割基本材料的高速旋转柱层析

从血浆和血清样本中纯化外泌体，并提取外泌体中RNA

Figure 1. 不愿同的血浆中纯化外泌体，并去除外泌体中RNA。

Norgen的血浆/血清外泌体纯化和RNA分离迷你试剂盒（Cat# 58300）被用作从来都不同血浆体型的外泌体中离出RNA，用到同 𒐪一采血管盒。之后用2 uL离心破乳的RNA看作RT-qPCR反馈的微信小程序模板，评定离心破乳的血浆外泌体miR-26a的延长现状。(A）血浆外泌体 miR-26a根据试样导入量的延长呈线形减低。(B）血浆外泌体 miR-26a的相对比较量表示出非常好的线形，收回率少于90%。

欧宝体育官方 图片信息

Plasma/Serum Exosome Purification and RNA Isolation Kits
50 Preps (Mini	Cat. 58300
25 Preps (Midi)	Cat. 58500
15 Preps (Maxi)	Cat. 58600

b.cf-DNA 提取纯化

PLASMA/SERUM CFC- DNA ADVANCED PURIFICATION KIT

血浆/血清 CFC-DNA高端纯化采血管盒(CAT. 68000 )

• 可灵巧解决0.5 mL至6 mL的血浆和血清键入量 
• 将cfc-DNA和ct-DNA浓缩咖啡至可调洗刷空间（25 ?L至50 ?L） 
• 在纯化的cfc-DNA中比较小化gDNA污染破坏 
• 生成的細胞外再循环DNA，无抑制性剂留 
• 仅需45min，能够抽取好的的DNA 
• 采应用在从Norgen的cf-DNA/cf-RNA保障管（Cat. 63950，Dx63950）、 Cell-Free DNA BCT?（Streck）、肝素、EDTA或百香果酸爬取的新鮮、存放或冷却血清/血浆 
• 在Hamilton重新化平桌上展开充分重新化的分离法的时候 
• 纯化立于动用Norgen专有树脂胶剥离 的翻转视频柱色谱法

从血浆和血清样品中快速简单地纯化各种大小的 CFC-DNA 和 CT-DNA

Figure 1. Norgens 血浆/血清 cfc-DNA 高級纯化生化试剂盒用在从 1 mL、2 mL、4 mL 和 6 mL 血浆中纯化配置 DNA，那些血浆由 EDTA 上收集整理的外周血算作抗凝剂光催化原理而成。 接着将2 uL纯化的DNA用做qPCR表现的摸板，进行靶向疗法体现单线程小体 CFC-DNA消费群的短ALU表观遗传靶标（115 bp）来分析纯化的cfc-DNA的 曲线。Norgen的血浆/血清cfc-DNA初级纯化化学药品盒在那些血浆比热容大小之 间表示出来色的曲线，曲线比重超越90%，得出结论从那些选择的血浆 比热容大小中高质量的回收利用cfc-DNA。

欧宝体育官方 信息：

Plasma/Serum CFC-DNA Advanced Purification Kit
50 Preps	Cat. 68000

PLASMA /SERUM CIRCULATING DNA PURIF I C A TION KITS ( SLURRY FORMAT)

血浆/血清循环法DNA纯化免疫试剂盒（吸收塔结构类型，比较适合大体上积范本与DIY） (CA T. 5060 0, 5 1200, 513 00)

• 从血浆和血清子样本中分头离大部分宽度的循环法DNA 
• 可添加病菌和菌类DNA 
• 符合于几种血浆和血清进入体积大概（50 ?L - 10 mL） 
• 将无限循环DNA浓缩造成到小的冲洗掉重量 
• 确定中下游选用确定的不同的洗刷策略性 
• 离心分离无抑制作用剂的循环法DNA，采适合用包含PCR、qPCR、甲基化比较敏感PCR少部分的一些选用 
• 与Streck无细胞核DNA BCT?管兼容 
• 可从奶中优质化量和高数量统计地分开DNA 
• 纯化因为转动柱层析，运用Norgen的专有硅胶粘合剂剥离 栽培基质

从血浆/血清样品中快速简单地分离循环DNA

Figure 1. 从0.5 mL和2 mL血浆中测试猿类5S遗传基因。

将Norgen的血浆/血清无限间歇DNA纯化Midi生化制剂盒（浆料后缀名）与Q 国欧宝体育官方 牌生化制剂盒来进行特别，以评估报告格式其分离法优效果血浆DNA的业务能力，以供 特别敏感的在下游技术应用，如qPCR。当进行处理0.5 mL和2 mL血浆时，Norgen 样件（蓝颜色）的扩张时间比竞争与合作队友Q的样件（紫色）速度更快，揭示 Norgen样件中长期存在更好优效果无限间歇DNA的利用率越高。

欧宝体育官方 信息:

Plasma/Serum Circulating DNA Purification Kits (Slurry Format)
50 Preps (Mini)	Cat. 50600
20 Preps (Midi)	Cat. 51200
10 Preps (Maxi)	Cat. 51300

cf-DNA 提取纯化

PLASMA/SERUM CELL-FREE CIRCULATING DNA PURIFICATION KITS 

血浆/ 血清无细胞膜再循环DNA纯化生化试剂盒 (CAT. 55500, D x 55500, 55100, D x 55100, 55600, D x 55600, 55800, D x 55800)

• 可隔离电脑病毒和真菌DNA 
• 需要满足其他血浆和血清搜索比热容（10 uL - 10 ml） 
• 将反复 DNA 高浓至可调洗刷重量（25 uL - 50 uL） 
• 分離的无细胞膜再循环DNA，含有控药物 
• 15-20半个小时内纯化高的质量量的DNA 
• 与Streck Cell-Free DNA BCT? 管兼容 
• 纯化应用于用Norgen专有光敏树脂分离法机质的离心力柱色谱

从血浆和血清样品中快速简单地纯化各种大小的循环DNA

Figure 1. 从采取青金桔🐎酸盐用作抗凝剂信息采集的50 uL、100 uL和200 uL血浆中纯化解离DN🧔A，并与Q厂家的化学制剂盒做较为。

取2 uL纯化的DNA是范本，在qPCR体现中开展纯化的基本5S rRNA遗传什么是基因组的相对于用户。随着时间推移仿品投入量的增高，5S rRNA遗传什么是基因组的相 对用户呈波形增高。与另外的分割工艺相对于，Norgen的化学制剂盒展示出 对基本5S rRNA遗传什么是基因组的最一直和非常高的收集率。欧宝体育官方 资料：

Plasma/Serum Cell-Free Circulating DNA Purification Kits
50 Preps (Micro)	Cat. 55500
50 Preps (Micro)	Cat. Dx55500
50 Preps (Mini)	Cat. 55100
50 Preps (Mini)	Cat. Dx55100
20 Preps (Midi)	Cat. 55600
20 Preps (Midi)	Cat. Dx55600
10 Preps (Maxi)	Cat. 55800
10 Preps (Maxi)	Cat. Dx55800

2、cf-DNA/cf-RNA 研究的实验室指南

介绍 

无神经细胞研发探讨提高一堆种方便、完全且非浸入性的判断和研发探讨方式方式 。利用收集两个怏速的血液循环系统范本，研发探讨人群就可以判断 癌证，具体分析未初生孩子的的特点，以及识別患儿的众多基因遗传规律无效。以往方式方式 如活检是绝望且浸入性的，还有就是很有有机会对 患儿来异常判断或形成更多的攻击力。为了更好地促进您在cf-DNA / cf-RNA研发探讨中提升较大回报，本网络书提高了调查台指 南，以为了保证精确度的可是。从的使用欧宝体育官方 的cf-DNA / cf-RNA储存管来收集和货物运输到核酸的纯化，可能包涵测试和测序等 上中游运用，Norgen为您的事业步骤的每步提高完全的缓解计划。

样本采集和保存 

由血浆模板中cf-DNA和cf-RNA（合称为无神经元核酸或cf-NA）的氨水浓度较低（1-100 pg/μL），意见与建议要肯定流程的血 溶剂积。方便整理模板，很好适用必须忽略EDTA或肝素的外周血整理管（BCT），这是因为这三种管都无非在高于了18分钟 的日期内维持模板，但是或许会要素下面安全使用。于此，要以高温（RT）装运，在EDTA或肝素管内整理的外周血将着手 溶血，然而不适应合确定cf-NA深入分析。要没保护的管，应在整理后不高于了1分钟抽滤环保再生资源回收血浆，并在到货前将其吸收 在-70°C的干冰里。要适用了cf存有管，则不都要顾虑这一丝。

依据所运用的爱护管，血样能在RT必要条件下儲存7天至30 天，而并不会导致辐射危害质量方向的溶血。针对于EDTA或肝素管来 说，就算儲存没法每星期，就会慢慢导致溶血。图1现示了在 Norgen的cf-DNA / cf-RNA收藏管内收藏的血渍中溶血的水 平与EDTA和其它种餐饮业能得到的血渍收藏管的是比较。与 EDTA比起来，Norgen管在30天内始终保持的血浆中赤红核蛋白（溶血的指数）质量方向较低，EDTA在多久收藏后慢慢现示明显的的 溶血。关键词排名2的之间的竞争对方在15天后慢慢现示溶血。

Figure 1. Norgen的cf-DNA/cf-RNA防锈管、竟争敌方的试管和 EDTA单管之間的赤红素降解率较为。赤红素是血组织细胞核裂解的另一🎶个非常好的指标值，会因为它在组织细胞核伤亡时被脱离出现，并更具现代感的吸光💜度弧度。

样本定量和质量确定 

NanoDrop? 測試设备不不适用作开展血浆中cf-DNA和cf-RNA的的重量和个数，如若其測試阀值为5 ng/μL，比血浆中cf-NA浓 更高出50到5000倍。在使用Bioanalyzer决定的RNA详尽性平均值（RIN）也被除掉成为的重量决定的方法，如若它依赖症于细 胞RNA，关键是18S和28S rRNA。如若样品过非常合适的净化处理和预备，这3个标上物都不该会出现。如若会出现等等标上 物，则样品已被生态破坏，很可能会性是与溶血欧宝体育官方 光于，于是可能会性对cf-NA測試无用。侥幸的是，根据低核酸水平和cf-NA特喜欢的人导入和降钙素原检测，普遍存在适用于的化学免疫生化试剂盒和的办法。Norgen提拱低丰度DNA和RNA定 量化学免疫生化试剂盒，敏锐度可达到到1 pg/μL超范围，还会更低。接着的图2凸显了不一相等DNA规模的qPCR统计图表，介绍信了这类。 只需在合理荧光核酸颜料的帮助下，这类化学免疫生化试剂盒应该与丝毫qPCR装置来操作。

可使用改良的Quant-iTTM RiboGreen? RNA检测试剂盒来定量cfRNA，而类似地改良的Quant-iTTM PicoGreen? dsDNA试剂盒可 定量cf-DNA♒。请参阅附录以了解协议的修改内容。 Agilent生产的高灵敏度DNA试剂盒可以检测低至5 pg/μL的DNA， 而他们的RNA 6000 Pico Kit 结合Bioanalyzer（图3）使用时，可以 检测到50 pg/μL的RNA。 Bioanalyzer示踪图还可以提供视觉定性 信息。纯样品只会在140-180 bp附近有一个峰，而含有gDNA污染 的样品则在较高bp范围内有第二个宽峰，如图4所示。

Figure 2. 便用Norgen的低丰度DNA化学发光法微生物培养基盒转换的代表英语性qPCR基线图꧑。扩张可观的察到500 fg范围内。

Figure 3. Bioanalyzer示踪图彰显cf-RNA的高猎取率（约19个荧光单 位）（A，Norgen血浆/血清cfc-RNA高档纯化化学制剂盒），同时cf♔🤡RNA猎取率较低的RNA示踪图（约4个荧光工作单位）（B，行业竞争敌方Q 嵌套循环核酸查重化学制剂盒）。

Figure 4. Bioanalyzer示踪图表明从Norgen的cf-DNA/cf-RNA保管员管 中换取的纯cf-DNA（颜色），经Norgen cf-DNA分離🅠生化试剂盒纯化，以 及从商用厨房血获取管上换取的具有刺激性gDNA环境破坏的示踪图（红颜色）。污 染示踪图内cf-D𓃲NA的增大是因此神经细胞水解时放的核小体。因此这些 对固定，这些是最应见的溶解DNA的方式中之一。

试样的色度也应该使用探究Ct值/PCR设置数据图表的非线性来肯定 （图5）。不断地PCR设置的加大，将要素发生反应的氧化物含量也 会加大。Ct值和PCR设置间的很强烈负相应，且无或比较小偏连接超时 性，说明PCR抑止剂的含量较低。抑止剂将随着溶血而打开样 品，这如前上述将使试样丧失。

Figure 5. 高色度核酸检样的象征着性Ct值/PCR放入图

附录 

 来说cf-NA定量分析，最好修饰Quant-iTTM RiboGreen? RNA检则生化微生物培养基盒和Quant-iTTM PicoGreen? dsDNA检则生化微生物培养基盒的方 法是将反應调整图片大小至20 μL，并在0.5 mL光电技术透明度管上做好。此外，别施用推送的原谅我真的喝醉了 因为我真的想你的 一不小心 我知道这样不应该 对你泰国依赖 DMSO货存的200倍摇匀（在TE 中），可是改成为1000倍摇匀。提高的NA标准规范应按有以下这说明準備：

 1) 对于浓度范围从1 ng/μL到100 pg/μL：

将给予的100 μg/mL RNA要求的2 μL做好稀释工作至以后大小为100 μL，用无核酸酶水稀 释至以后浓度值为2 μg/mL。这将用到打算要求。

1X TE (?L)	2 ?g/mL RNA	1000-fold Dilution of RiboGreen? (?L)	Final RNA Concentration
0	10	10	1 ng/?L
5	5	10	500 pg/?L
7.5	2.5	10	250 pg/?L
9	1	10	100 pg/?L

2) 对于50 pg/μL到5 pg/μL的浓度：

将2 μg/mL溶剂的5 μL与95 μL核酸酶什么是自由水稀释溶解，刷快结果RNA浓硫酸浓度为100 ng/mL，然而备好下例条件溶剂。不过，这也适 使用于DNA条件。不起作用相混物由1μL样件、9 μL 1X TE和10μL RiboGreen?或PicoGreen?微生物培养基组成部分。

1X TE (?L)	2 ?g/mL RNA	1000-fold Dilution of RiboGreen? (?L)	Final RNA Concentration
0	10	10	1 ng/?L
5	5	10	500 pg/?L
7.5	2.5	10	250 pg/?L
9	1	10	100 pg/?L

3、血浆Small RNA-seq工作流程：

1、处理与保存图片 

cf-DNA/cf-RNA Pre𒁃servative Tube，cf-DNA/c f-RNA 保护管ꦉ (Cat. Dx69350, 69350) 

• 在空调温度下存放 cf-RNA、cf-DNA 和 ct-DNA 算长30天 

• 可以防止装运操作过程中的溶血 

• 血浆收购率高 

• 不标稳定剂的防腐材料剂，无DNA化学交联 

• 与市售的cf-RNA和cf-DNA纯化形式兼容 

• 提供了有点CE-IVD安全认证的欧宝体育官方 版本的

	Norgen Biotek	Competitor 1
空调温度安稳存有时间表	30 Days	7 Days
溶血率	最小化	显著溶血
血浆回收体积	~5-6 mL	~3-4 mL
固定剂	不含	含有固定剂

2 、RNA 提取纯化

Plasma/Serum RNA Puri?cation Kit ，血浆/血清 RNA 纯化试剂盒 (Cat. 55000, 56100, 56200) 

• 采取Norgen专有的硅胶粘合剂基本材料来纯化RNA 
• 分离处理所有的与血清质联系的巡环cf-RNA，分为細胞外囊泡的RNA 

• 通过并冲洗掉那些的RNA，尽管其粗细或GC含锌量是怎样的，就不能有较差 

• 不动用平台RNA 
• 不应用苯酚或氯仿等有风险性电化学试剂 
• 可处里50 uL至5 mL的血浆 
• 纯化的RNA与中游使用兼容，如qPCR、NGS、微阵列等。

Plasma/Serum Exosome Puri?cation and RNA Isolation Kit 

 血浆/ 血清外泌体纯化及 RNA 提取试剂盒 (Cat. 58300, 58500, 58600)

• 使用Norgen的专业硅橡胶栽培基质，先纯化外泌体，再纯化RNA。 
• 结合实际并洗刷各种的RNA，究竟其尺寸或GC含锌量怎么才能，全都不产生误差率 
• 不选择质粒载体RNA 
• 不利用苯酚或氯仿等有风险性化学反应品 
• 可治疗50 μL至10 mL的血浆 
• 纯化的RNA与在下游采用兼容，如qPCR、NGS、微阵列等。

3 . NGS服务 (SMALL RNA 测序) 

Library Preparation: Small RNA Library Prep Kit 

文库制备： 小RNA文库制备试剂盒 (Cat. 63600) 

• 专门针对较低輸入的RNA实行了调优，还是比较是根据体液的RNA 
• 几瓦4九个indices 的可以选择性 
• 快速的和简略的工作任务工作流程 

测序 

• Illumina 软件 

生物信息分析 

• 利用海洋生物企业信息学阐述清楚转录后改善制度化 
• 研究方案遗传基因的差异表达出高并发现新的生物体图标物 
• 详细的报告单和任何时候可刊登的文字加图片数据资料

4、无创产前检测NIPT，开放平台工作流程

1. 收集与保存 

cf-DNA/cf-RNA Preservative Tube，cf-DNA/c f-RNA 保存管 (Cat. Dx69350, 69350)

• 在环境温度下保持 cf-RNA、cf-DNA 和 ct-DNA 过去了 30 天 
• 以避免货运流程中的溶血 
• 血浆环保再生资源回产出率高 
• 中含放置剂的防锈剂，无DNA交连 
• 与市售的cf-RNA和cf-DNA纯化措施兼容 
• 给予带着CE-IVD企业认证的欧宝体育官方 传奇

	Norgen Biotek	Competitor 1	Competitor 2
在常温保护时间间隔	30 days	14 days	最高 10 days
溶血率	是较为小的化	显著溶血	低溶血
血浆回收率	~5-6 mL*2	~3-4 mL*2	~5 mL*2
固定剂	不含	含固定剂	不含

References 

a. Ward Gahlawat A, Lenhardt J, Witte T, et al. Evaluation of storage tubes for combined analysis of circulating nucleic acids in liquid biopsies. International Journal of Molecular Sciences. 2019;20(3):704. doi:10.3390/ijms20030704 

b. Maass KK, Schad PS, Finster AM, et al. From sampling to sequencing: A liquid biopsy pre-analytic workflow to maximize multi-layer genomic information from a single tube. Cancers. 2021;13(12):3002. doi:10.3390/cancers13123002

2 . DNA提取纯化 

Plasma/Serum Cell-Free Circulating DNA Puri?cation Kits 血浆/血清无癌细胞循环往复DNA纯化生化试剂盒(Cat. 55500, 55100, 55600 and 55900) 

• 合理利用Norgen集团公司专有的硅橡胶欧宝体育官方 纯化细胞核外重复DNA 
• 分離所以蛋清紧密结合的循环法cf-DNA 
• 不管在的大小或GC含铁是怎样，都能捕捉到和冲洗掉所有DNA，还没有问题 
• 不选择苯酚或氯仿等安全隐患化学工业品 

• 可以处理10μL到10 mL的血浆 

• 将DNA冲洗掉到25-50 μL的冲洗掉球体积 
• 纯化的DNA与qPCR、NGS等上中游操作兼容

	Norgen Biotek	Competitor 1	Competitor 2
上样量	10 ?L - 10 mL	1 mL - 10 mL	3 mL to 10 mL
洗脱体积	25 ?l - 50 ?l	20 ?l - 80 ?l	35 ?l
填料树脂	专利碳化硅	硅胶	硅胶
需要预浓缩步骤吗？	No	Yes	No
下游应用兼容性	Yes	Yes	Yes
整体优势	Norgen使用碳化硅技术，可以捕 获低浓度的cf-DNA	可以部分自动化	非常快速和简单的协 议
整体劣势	该化学药品盒不具备着全自动进行的本事。 Norgen的Plasma/Serum cfcDNA初中级纯化化学药品盒（Cat. 68000）可进行全自动 化，是一个个更好的选购。	使用二氧化硅，已被证明 能预先与高GC含量和高 分子量的DNA结合，造成 偏差。	使用二氧化硅，已被证明 能预先与高GC含量和高 分子量的DNA结合，造 成偏差。

3 、文库制备 

Norgen不能提供DNA的文库制 备化学药品盒，然而，欧宝体育官方 的RNA纯化和DNA区分化学药品盒与其他中用全基 因组测序的商业性的文库分离纯化化学药品盒兼容

4 .测序和数据分析 

有着打算好的DNA，能够开展全 染色体组测序来洞察探讨全部胎宝宝染色体组，以决定有没有任何基因异常处理。 任何有应性需求的的办法属于SNP探讨和微阵列

5、客户成功案例： 

Alex Rolland: 使用外泌体 ct-DNA 改善癌症诊断

我的名字是Alex Rolland，我是Cancer Treatment Options and Management Inc.（CTOAM）和Liquid Biopsy Labs的联合创始人和首 席科学家。 

在欧宝体育官方 找寻从血浆中领取ct-DNA的实验免疫免疫生化试剂盒时，我是弟一下难道Norgen Biotek，时间间隔发展趋势在2015年末/2021初。欧宝体育官方 当下测量软件了无比多的实验免疫免疫生化试剂 盒并看看了发表评论，但都并未赢得已经可以的ct-DNA量，不能在TaqmanddPCR平格斗台赢得没想到。Norgen的实验免疫免疫生化试剂盒对于离心法工艺，易领取，并 且默认值小形实验免疫免疫生化试剂盒使欧宝体育官方 可赢得宝贵的可测量软件的ct-DNA，对此我把 Norgen减弱招引！ 

 Norgen是必然对欧宝体育官方 引致渴求后果的有限工司。最后，欧宝体育官方 持续在的使用另一种来自五湖四海大有限工司的ct-DNA同步保存管，它不得欧宝体育官方 从两 个管内荣获2-4 mL的血浆/血清。可是，许多防腐钢管存有间题，Norgen的的二级探究科学课家提醒我来尝试Norgen的管 子。又一次，后果令人感动目瞪口呆，欧宝体育官方 也可以从1个防腐钢管中荣获高达7-10 mL的血浆/血清。这特殊增长了欧宝体育官方 的年产量，并使欧宝体育官方 也可以去下步性的深化。

总结出一下下欧宝体育官方 在Norgen欧宝体育官方 中挖掘的优劣势: 

• 从血官提升高生产量的血浆/血清 

• 从这些的提现实验试剂盒中收获高销售量的癌症晚期/胚 泡重要性的ct-DNA

Alex Rolland 在分析中施用的Norgen欧宝体育官方

案例研究

案例1

 1名乙状结肠癌患有在其良性良性肿瘤DNA测序中表明了PRKDC（良性良性肿瘤抑 制dna）的一款 即为突变体（VUS）。欧宝体育官方 完成了一大款 通过 来计算机软件的研究/回文序列固执性研究，可是体现 此突变体很可 能是发病的。实际认定书，欧宝体育官方 接着的使用它来论文检测此患有的早 期重复发作情形，并测评控制治疗效果。

Figure 1. 从用户全血中更改的PRKDC A358T外泌体DNA量。误差率线提出95%置信时间（CI）

案例2 

该患者患有晚期乳腺癌，欧宝体育官方 的测序结果显示其PIK3CA基 因发生了突变。当时，用于治疗特定类型乳腺癌的药物 Alpelisib在加拿大尚未获得批准，因此欧宝体育官方 联系了药品制造 商并说服他们提供免费的药物，同时从加拿大卫生部获得 了同情使用权，并使用ct-DNA监测患者的治疗反应。不幸 的是，在这种情况下，患者只能短暂地耐受药物，并不得 不停止使用。正如您所看到的，欧宝体育官方 的测试显示了未经有 益治疗的ct-DNA增加。

Figure 2. 从病号全血中提高的PIK3CA P1047L外泌体DNA量。不确定度线代表95%置信时间（CI）

真实的科学家，真实的故事，真实的成功！

一、尿液收集&保存

URINE COLLECTION AND PRESERVATION TUBES 小便采集与包存管 (CAT . 18116 , 18120, 18111, 18129)

• RNA/microRNA/DNA/球营养物质，能能在常温下保存文档可超过2年 
• 与基本数DNA、总RNA、microRNA和蛋清质分離做法兼容 
• 储存剂以单极量气态文件格式（安瓿）供给 
• 导出剂也以晾干论文格式在管内能提供 - 尿夜回收和导出管 
• 他们的尿液提取和留存管有4种便的长宽比：5 cc管、15 cc管、50 cc管和 120 cc杯

简单且快速地保存尿液样本

Figure 1. Norgen的尿手机截图剂中RNA的固相关性

从多家键康爱心捐赠者分类整理的排尿模板并交织，接下来将的排尿预包装到 Norgen的的排尿分类整理和保管管（5cc）（Cat.18116）中，保管在-20° C、4°C和空调温度下有24六个月大左右左右。接下来安全使用Norgen的的排尿总RNA纯化 Maxi Kit（浆料格试）（Cat.29600）从保管的的排尿中在时候0、3个 月、多六个月大左右左右、4六个月大左右左右、15六个月大左右左右、1多六个月大左右左右、16六个月大左右左右和24六个月大左右左右后之后分割 的排尿RNA。

欧宝体育官方 信息：

Urine Collection and Preservation Tubes
1 Tube, 50 Tubes	Cat. 18116, 18118 (5 cc)
1 Tube, 50 Tubes	Cat. 18120, 18122 (15 cc)
1 Tube, 50 Tubes	Cat. 18111, 18113 (50 cc)
1 Cup	Cat. 18129 (120 cc)
1 Tube, 50 Tubes	Cat. 18124, 18126 (防腐剂-单卖)

a. cf-RNA 提取纯化

URINE CELL-FREE CIRCULATING RNA PURIFICATION KITS 

阴道分泌物无細胞反复RNA纯化采血管盒(CAT. 56900, 57000, 57100)

• 250 μL 至 30 mL ，需要满足多类尿水上样量 
• 无苯酚萃取原理 
• 无的载体RNA 
• 通过并洗刷所有的RNA，无论怎样规格或GC纯度咋样，无较差 
• 将无限循环 RNA 和外泌体 RNA 浓缩液成 50 μL 至 100 μL 的智能化过柱体积计算 

• 25 - 30 min 分离出纯化优质量水平 RNA 

• 纯化的RNA采用于不同的河流下游适用，属于Small RNA测序 

• 纯化通过使用的Norgen专有树酯破乳基本材料的离心力柱色谱

分离所有大小的循环和外泌体RNA，包括microRNA

Figure 1. 也不同尿体积大小中纯化无细胞系间歇RNA和外泌体RNA。 

操作Norgen的阴道分泌物无血人体细胞重复RNA纯化小免疫试剂盒（文件目录号56900） 从0.5 mL、1 mL和2 mL阴道分泌物子子样本中纯化无血人体细胞重复和外泌体RNA。 而后，将纯化的RNA中取2微升作RT-qPCR生理反应的建筑模板，以测评 （A）一般的5S rRNA转录本和（B）miR-21的测序状况。即使是 （A）5S rRNA转录本还（B）miR-21的一般Ct值都随着时间推移子子样本读取 量的加入而直线可以减少。

欧宝体育官方 信息：

Urine Cell-Free Circulating RNA Purification Kits
50 Preps (Mini)	Cat. 56900
20 Preps (Midi)	Cat. 57000
10 Preps (Maxi)	Cat. 57100

URINE EXOSOME PURIFICATION AND RNA I SOL ATION KITS 

尿外泌体纯化和RNA提取微生物培养基盒 (CAT. 58400, 58700, 58800)

a. 大多数大小不一或GC含铁，都在以配合和过柱各个RNA，没能误差值 b. 离心分离各式大小不一的外泌体RNA，涉及microRNA c. 可变性的尿中输人量（250 ?L至30 mL） d. 不必须要苯酚提取，淀粉酶酶K进行处理或承载RNA 

e. 不需要耗时的超速离心，过滤或特殊注射器 

f. 不需要沉淀试剂或过夜孵育 

g. 与任何物种的尿液兼容 

h. 纯外泌体被纯化并且不含任何其他RNA结合蛋白

i. 纯化对于运用Norgen专有树脂胶溶合栽培基质的三维旋转柱层析

完整的尿里外泌体的纯化和丰度，达到工作探讨所需

Figure 1. 从来不同排尿量中纯化的外泌体中离RNA。 用到Norgen的小便外泌体纯化和RNA分割法化学化学药品盒（Cat. 58800）用到想同的化学化学药品盒也不同尿液中纯化外泌体，并分 离RNA。其次，用到分割法的RNA的2微升作RT-qPCR反馈 中的钢板，测试分割法的尿外泌体miR-30a的PCR扩增原因。（A） 时间推移仿品填写量的增强，尿外泌体miR-30a呈平滑网络越来越低趋 势。B）尿外泌体miR-30a的相应量展现出积极的平滑网络相互关系， 回收公司率小于90％。

欧宝体育官方 信息：

Urine Exosome Purification and RNA Isolation Kits
50 Preps (Mini)	Cat. 58400
25 Preps (Midi)	Cat. 58700
15 Preps (Maxi)	Cat. 58800

b. cf-DNA 提取纯化

URINE CELL-FREE CIRCULATING DNA PURIFICATION KITS 

 小便无人体细胞巡环DNA纯化实验试剂盒(CAT. 56600, 56700, 56800)

分开类病毒DNA 用到于有差异 体型的尿液浑浊手机输入（250 ?L - 30 mL） 将间歇DNA浸提到灵活多变的过柱空间领域内（50 ?L - 100 ?L） 分离处理的癌细胞外配置DNA，无抑制性剂 15-20min，即得高水平量DNA 与Norgen的的尿中包存剂和许多市售的尿中包存剂兼容 纯化系统设计用Norgen专有的硅橡胶提取基本材料的平移柱色谱法。

从新鲜、保存或冷冻的尿液样本，分离出所有大小的循环DNA

Figure 1. 在检查猿类5S基因遗传时，确实他们的尿液上皮细胞游走DNA样板中的抑 制量。

 

选择Norgen的他们的尿夜血细胞留存DNA纯化Maxi化学化学药物盒（款式56800）， 从10 mL、20 mL和30 mL他们的尿夜中离DNA。在20 ?L的qPCR引响中 选择其他质量的洗刷物（2、4和8 ?L），观测Ct值能否有变大。随 着模版网站量的加入，Ct值的加入将明显揭示模本中留存PCR抑止剂。 在qPCR中选择其他洗刷物质量用于模版网站并不引响由qPCR出现的Ct 值。实际上上，Ct值非常倾向于随PCR手机输入质量的加入而变大，揭示使 用Norgen化学化学药物盒纯化的他们的尿夜中的DNA不标通畅留存于他们的尿夜中的一般 抑止剂。

Urine Cell-Free Circulating DNA Purification Kits
50 Preps (Mini)	Cat. 56600
20 Preps (Midi)	Cat. 56700
10 Preps (Maxi)	Cat. 56800

2、尿液 Small RNA- Seq 工作流程

1、 收集与保存 

Urine Collection and Preservation Devices - 5cc, 15cc, 50cc, 120cc, single dose， 

• 尿里回收利用与保留管 (Cat. 18118, 18122, 18113, 18126, 18129) 
• 给予很多尺寸的朋友融洽型尿样回收控制系统 
• RNA/microRNA/DNA/血清质行在空调温度下储存达到2年 
• 兼容行业化的cf-RNA纯化方式 
• 在运载他们的尿液时，也可以在低温下同步保存游走大原子核、脱层组织细胞和微怪物

	Norgen Biotek	Competitor 1	Competitor 2
室温保存时长	2 年+	7 天	30 天+
使用简便	Yes	No	No
保存的生物标志物	cf-DNA, cf-RNA, exosomes, proteins	DNA and RNA	DNA and RNA

2、RNA获取纯化 

Urine Cell-Free Circulating RNA Puri?cation Kit，

尿水无细胞核反复的RNA纯化生化试剂盒 (Cat. 56900, 57000, 57100) 

• 根据Norgen的专有不饱和树脂欧宝体育官方 纯化癌细胞外嵌套循环RNA 

• 隔离那些血清紧密联系的配置cf-RNA，有受损细胞外囊泡的RNA 

• 而是大小不一或GC的含量，都能结合在一起和过柱那些RNA，无歧视 

• 不适用的载体RNA 

• 不实用有风险物理品，如苯酚或氯仿 

• 能够整理250 ?L到30 mL的尿 

• 纯化的RNA与中游软件（如qPCR、NGS、微阵列等）兼容。

Urine Exosome Puri?cation and RNA Isolation Kit， 

尿里外泌体纯化和RNA分离法免疫试剂盒 (Cat. 58400, 58700, 58800)

3 . NGS功能 (SMALL RNA 测序) Library Preparation: Small RNA Library Prep Kit 

文库制备： 小RNA文库制备试剂盒 (Cat. 63600) 

• 重要性超底读取的RNA来进行了简化，特别是来体液的RNA 

• 增至4九个indices 的可以性 

• 飞速和非常简单的本职工作环节

测序 

• Illumina 品台

海洋生物数据信息研究

• 实现海洋生物讯息学浅析来表达转录后管控 

• 查看对比分析抒发高并发现新的生物体象征物 

• 完成的申请书和及时可提出的文图统计资料

三、经典文章 / PUBLICATIONS

1. From Sampling To Sequencing: A Liquid Biopsy Pre-Analytic Workflow To Maximize Multi-Layer Genomic Information From A Single Tube //www.mdpi.com/2072- 6694/13/12/3002 

2 . Evaluation of Storage Tubes for Combined Analysis of Circulating Nucleic Acids in Liquid Biopsies //www. mdpi.com/1422-0067/20/3/704 

3 . Comprehensive evaluation of methods to isolate, quantify, and characterize circulating cell-free DNA from small volumes of plasma //link.springer.com/article/10.1007/s00216-015-8846-4 

4 . Effect of microRNA GC Content on RNA Purification Efficiency (App Note made by Norgen) //norgenbiotek. com/sites/default/files/resources/plasma_serum_circulating_ and_exosomal_rna_purification_kit_slurry_format_effect_of_ microrna_gc_content_on_rna_purification_efficiency_application_notes_465_0.pdf 

5 . Comparison of Four Commercial Kits for Isolation of Urinary Cell-Free DNA and Sample Storage Conditions // www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7236016/ 6 . Measurement Biases Distort Cell-Free DNA Fragmentation Profiles and Define the Sensitivity of Metagenomic Cell-Free DNA Sequencing Assays //academic.oup.com/clinchem/ article/68/1/163/6410769?login=false