介质液体活检：恶性肿瘤早筛 & 微创孕前验测（NIPT）改善策划方案：用于癌症早筛和无创产前检测（NIPT）的完整工作流程解决方案

简介

一、完整的血浆/血清无细胞工作流程

    1、cf-DNA /cf-RNA收集与保存管

        a. 从血浆/血清中纯化cf-RNA        b. 从血浆/血清中纯化cf-DNA

    2、cf-DNA /c f-RNA研究的实验室指南

    3、血浆Small RNA测序，推荐工作流程

    4、无创产前检测NIPT，开放平台工作流程

    5、权威客户案例

二、完整的尿液无细胞工作流程

    1、尿液收集和保存设备（管，杯，桶)

        a. 从排尿中提炼cf-RNA        b. 从尿液浑浊中导入cf-DNA

    2、推荐的小RNA测序工作流程

三、文章与出版物

一、简介：

Norgen Biotek 展示完整篇的液状体活检业务方案，包涵样版采摘和存放机 、cf-DNA/cf-RNA/exosomes纯化、小RNA/RNA队列和高等生物学内容学定量分析。欧宝体育官方 的样版永久维持技艺，比较对应血浆、的尿液和口水，在永久维持时光、样版详尽性、搬家和储备还有多分折物永久维持上兼具多个优质。与应用场景矽胶的水平其他，Norgen的专有增碳硅核酸纯化水平被优转化成从其他类型的液體活检中截获太低量的存在核酸，而就不会对存在核酸的字段程度表面担任何侧重性。使用欧宝体育官方 先进性的生物技术内容学讲解道具和效果，特备是在Illumina平桌上的测序方面，Norgen早就办理了来于优秀研究方案单位的异常都具有试练性的子样本。

液体活检，作为癌症检测的样本类型

01、非注入性样本量抓取02、符合于查测各个肠癌型号03、给予全面的的异质性消化道疾病讲解04、提供数据团伙动力原则的个人观点05、同意信息的传染性疾病监视器,以监视器趋势中的淋巴肿瘤异质性

1、血清/血浆样本收集&保存

    CF-DNA/CF - RNA PRESERVATIVE TUBES

    cf-DNA/cf-RNA 保存管 (CAT. 63950, D x 639 50)

• CE-IVD 标制符合国家欧共体指令码 98/79/EC 
• 至关适当用做IVD休外程度工作任务工作流程 
• 在单分液漏斗同时保持cf-DNA和cf-RNA

• 不含固定剂的防腐剂，无DNA热塑 

• 在室内温度下留存cf-DNA/ct-DNA，30天；37°C下也可以留存8天 

• 在空调温度下保留cf-RNA ，30天 

• 在室温下将循环肿瘤细胞 （CTC） 保留 14 天 

• 车辆/车辆后无血浆余量亏损资金 

• 必免溶血，而更快地提取血浆
• 解决办法血細胞凋亡和人类基因组DNA场面描写化 
• 研发高的质量量/需求量的血浆cf-DNA/ct-DNA/cf-RNA 
• 用重力作用方法在10 mL的试分液漏斗抽出8.4 mL的血细胞

无细胞的循环DNA和RNA采集与保存 （全血样本）

Figure ♍1.🅠 条件体温存贮对cf-DNA（pDNA）的作用，以短Alu（115bp）片 段实例，并且对基因遗传组DNA（gDNA）的作用，以大Alu（247 bp）电影片段 实例。

将血样分别为放：1）EDTA管，2）同行与合作者管或 3）Norgen的cf-DNA / cf-RNA实现管上，并在恒温下放置。在不增强性高性时，主要pDNA的ALU什么是基因组（115 bp）和主要gDNA的ALU什么是基因组（247 bp）的关卡应实现没变，表 明适度不增强性高性和无溶血。在EDTA管上处理并在恒温下存放的血浆中未观擦到 cf-DNA的不增强性高性和很广的溶血。同行与合作者彰显在1四天后不有效地的不增强性高性性，而 Norgen的cf-DNA / cf-RNA实现管上的cf-DNA在恒温下不增强性高性30天。

欧宝体育官方 信息：

cf-DNA/cf-RNA Preservative Tubes		用于体外诊断用途 CE-IVD 标志 符合欧盟指令 98/79/EC
50 Tubes	Cat. Dx63950
50 Tubes	Cat. 63950

a. cf-RNA 提取纯化

PLASMA / SERUM CFC-RNA ADVANCED PURIFICATION KIT 

血浆/ 血清 cf-RNA 高级纯化试剂盒(CAT. 68200)

• 靠谱的血浆/血清输人区间从1 ml到6 ml 
• 无苯酚分离出来 
• 无媒介RNA 
• 无成见地结合在一起和过柱那些RNA，无论是否多少或GC水平 
• 将循环系统RNA和外泌体RNA精炼到25 uL至50 uL，具备灵活性高管控冲洗掉体 
• 积仅需45min，即得优质化量的RNA 
• 在Hamilton MicroLab Nimbus安于现状行全主动纯化程序流程图 
• 纯化的RNA不适于各式上中游软件，涉及到小RNA测序 
• 纯化为三维旋转柱色谱法，运用Norgen的专有硅橡胶破乳机质

分离提取，所有大小的循环和外泌体RNA，包括microRNA

Fi🍨gure 1. 使用不同的𓃲cfc-RNA纯化方法从K2EDTA血浆中纯化的RNA中 扩增miR-21和miR-16的rt-qPCR。

与使用Q品牌的纯化试剂盒（于二氧化硅的技术）纯化的RNA中扩增相 同的miRNA目标相比，Norgens专利的SiC技术，不论是手动提取和自动 设备提取都更有优势。

欧宝体育官方 信息：

Plasma/Serum cfc-RNA Advanced Purification Kit
50 Preps	Cat. 68200

PLASMA / SERUM CIRCULATING AND EXOSOMAL RNA 

PURIFICATION KITS (SLURRY FORMAT) 

血浆/血清无限循环和外泌体 RNA纯化实验试剂盒 （浆料表现形式，适于大至积子样本与DIY） (CAT . 42800 , Dx428 00, 51000 , 5 0900, 29500，足够有差异上样量)

• CE-IVD 标准，符合要求欧洲共同体理事会会标准 （EU） 第 2017/746 号 （Dx42800） 
• 提取所有尺寸的间歇和外泌体RNA，具有microRNA 
• 应应用于四种血浆和血清模板填写体积太（0.25 mL至5 mL） 
• 将反复和外泌体RNA精提成较小的洗刷面积 
• 区分循环法和外泌体RNA，没有减缓剂 
• 无偏激地紧密联系和洗刷各种大大小小或GC分子量的RNA 
• 提高旋轉柱或96孔板版式 
• 适用真空箱或离心力法除理96孔板 
• 纯化的RNA使用作很多种上中游使用，涉及到小RNA测序
• 与Streck无受损细胞RNA BCT管兼容 
• 纯化体系结构采用Norgen专有不饱和树脂溶合机质的三维旋转柱层析法

从血浆/血清样品中快速简单地分离循环RNA，包括外泌体RNA

Figure 1. 脱离和在线检测各不相同血浆体积的巡环RNA。

应用Norgen的血浆/血清重复RNA纯化和外泌体RNA提取小化学制剂盒（浆 料论文格式）从0.5 mL、1 mL和2 mL血浆中提取重复RNA。如果，将纯化后 的RNA的3 ?L做为RT-qPCR反应迟钝的模版网站，以测量人间5S什么是基因。 从全部的利用的血浆合格品容积中查重到5S表观遗传。 5S rRNA的PCR扩增体现 根据 合格品导入量的增长，RNA的规模也增长。这使用根据合格品导入量的增长 而拉低Ct值来写出。从0.5 mL血浆中刘海离的RNA用绿线写出，从1 mL血 浆中刘海离的RNA用绿线写出，而从2 mL血浆中刘海离的RNA用蓝线写出。 黑线对应着于无模板制作较。

Plasma/Serum Circulating and Exosomal RNA Purification Kits (Slurry Format)
50 Preps (Mini)	Cat. 51000
50 Preps	Cat. 42800
50 Preps	Cat. Dx42800
25 Preps(Maxi)	Cat. 50900
1 x 96-Well Plate	Cat. 29500

cf-RNA 提取纯化

PLASMA /SERUM RNA PURIFICATION KITS 血浆/血清 RNA 纯化生化试剂盒 (CAT. 55000, 56100, 56200)

• 分开全部的的大小的间歇和外泌体RNA，也包括microRNA 
• 用来于多种类血浆和血清样例输人占地：50 ul to 200 ul 
• 无酚转化成 
• 无媒介RNA 
• 无成见地搭配和过柱其它宽度或GC含铁的RNA 
• 将无限循环和外泌体RNA浓缩提炼成较小的过柱表面积：10 ?L to 100 ?L 
• 在15-20几分钟内纯化优质化量的RNA 
• 纯化后的RNA支持于多种河流下游应用领域，比如小RNA测序 
• 与Streck无細胞RNA BCT?管兼容 
• 纯化系统设计Norgen专有的硅胶粘合剂剥离 机质的旋轉柱层析法

从血浆/血清样品中快速简单地纯化循环RNA和外泌体RNA

Figure 1. 在检则人類5S转录本和miR-21时，确立血浆RNA样件中产生的 减弱量。

安全使用Norgen的Plasma/Serum RNA纯化最好实验试剂盒（Cat. 56200）从 1.5 mL、3 mL和5 mL血浆中拆分DNA。将过柱物的加入体积大概（2、4和8 ?L）在20 ?L治愈录体现，第三来qPCR加强体现，观察动物Ct值的有效降低 状况。建筑模板的数量加入时Ct值的加入将看清楚地证明土样中产生PCR抑制性 剂。在不可逆转录症状中利用的PCR放入重量的增多没影向qPCR测序获取的 Ct值，尽管是相对（A）5S rRNA转录本亦或是（B）miR-21。真实上，Ct 值近年来PCR放入重量的增多而减少，这证明利用Norgen的生化试剂盒从血 浆中纯化的RNA只含多见的减弱剂。欧宝体育官方 问题：

Plasma/Serum RNA Purification Kits
50 Preps (Mini)	Cat. 55000
20 Preps (Midi)	Cat. 56100
10 Preps (Maxi）	Cat. 56200

PLASMA/SERUM EXOSOME PURIFICATION AND RNA ISOLATION KITS 

血浆/ 血清外泌体纯化及RNA提取试剂盒 (CA T. 58300, 58500, 58600)

• 完好血浆/血清外泌体的纯化和生物富集，于基本功能探索 
• 就算粗细或GC分子量，都能转移那些粗细的RNA，包涵microRNA， 没了优越感 
• 满足了不同模板填写体积大小的需求 

• 无酚导入 

• 就不需要球蛋白酶K办理或形式RNA 
• 不用再等待时间的高速超速离心分离、过虑或唯一性针剂器 
• 需不需要水解免疫试剂或包夜孵育，可在任何人动物群的血浆/血清 
• 纯外泌体要经过纯化，可含任意其它RNA切合蛋白质 
• 纯化特征提取Norgen专有的硅胶粘合剂拆分机质的旋轉柱层析

从血浆和血清样本中纯化外泌体，并提取外泌体中RNA

Figure 1. 一直同的血浆中纯化外泌体，并导入外泌体中RNA。

Norgen的血浆/血清外泌体纯化和RNA分离迷你试剂盒（Cat# 58300）被把他们拿来从♎未同血浆质量的外泌体中分发型离出RNA，运行同 一化学制剂盒。接下来用2 uL脱离的RNA用作RT-qPCR反馈的设计，分析评估脱离的血浆外泌体miR-26a的PCR扩增环境。(A）血浆外泌体 miR-26a随之试样输进量的增添呈非线型上升。(B）血浆外泌体 miR-26a的相对性量界面显示出优൩良的非线型，回笼率少于90%。

欧宝体育官方 描述

Plasma/Serum Exosome Purification and RNA Isolation Kits
50 Preps (Mini	Cat. 58300
25 Preps (Midi)	Cat. 58500
15 Preps (Maxi)	Cat. 58600

b.cf-DNA 提取纯化

PLASMA/SERUM CFC- DNA ADVANCED PURIFICATION KIT

血浆/血清 CFC-DNA初级纯化微生物培养基盒(CAT. 68000 )

• 可灵便处置0.5 mL至6 mL的血浆和血清键入量 
• 将cfc-DNA和ct-DNA浓缩液至可变气门正时洗刷体型（25 ?L至50 ?L） 
• 在纯化的cfc-DNA中超小化gDNA环境污染 
• 领取的体细胞外反复的DNA，无抑制作用剂残余的 
• 仅需45min，既能提现创新型的DNA 
• 应用到从Norgen的cf-DNA/cf-RNA守护管（Cat. 63950，Dx63950）、 Cell-Free DNA BCT?（Streck）、肝素、EDTA或柠檬汁酸获取的新鲜度、手机截图或速冻血清/血浆 
• 在Hamilton一键化平舞台上使用根本一键化的隔离具体步骤 
• 纯化立于便用Norgen专有光敏树脂溶合的电动机柱色谱法

从血浆和血清样品中快速简单地纯化各种大小的 CFC-DNA 和 CT-DNA

Figure 1. Norgens 血浆/血清 cfc-DNA 专业纯化化学药品盒适用于从 1 mL、2 mL、4 mL 和 6 mL 血浆中纯化不断循环 DNA，这么多血浆由 EDTA 上获得的血液循环系统看作抗凝剂提纯而成。 而后将2 uL纯化的DNA作为qPCR影响的网站模板，完成靶向疗法代表英语双核小体 CFC-DNA群的短ALU遗传基因靶标（115 bp）来监测纯化的cfc-DNA的 非规则化。Norgen的血浆/血清cfc-DNA高级工程师纯化免疫试剂盒在任何血浆容积大概之 间表现出得色的非规则化，非规则化百分数超90%，得出结论从任何选择的血浆 容积大概中效率高收回cfc-DNA。

欧宝体育官方 信息：

Plasma/Serum CFC-DNA Advanced Purification Kit
50 Preps	Cat. 68000

PLASMA /SERUM CIRCULATING DNA PURIF I C A TION KITS ( SLURRY FORMAT)

血浆/血清再循环DNA纯化免疫试剂盒（料浆类型，适大至积样本量与DIY） (CA T. 5060 0, 5 1200, 513 00)

• 从血浆和血清模板中分发型离所以尺寸的循环往复DNA 
• 可分离出来病毒感染和疾病DNA 
• 符合于好几种血浆和血清读取体型（50 ?L - 10 mL） 
• 将反复DNA精提到小的过柱面积 
• 会按照上下游广泛应用使用各不相同的冲洗掉原则 
• 溶合无限注射剂的不断循环DNA，实在涵盖PCR、qPCR、甲基化敏感性PCR以外的其它APP 
• 与Streck无神经元DNA BCT?管兼容 
• 可从鲜羊奶中高品质理和高数地分离处理DNA 
• 纯化由于翻转视频柱层析，运用Norgen的专有硅橡胶脱离机质

从血浆/血清样品中快速简单地分离循环DNA

Figure 1. 从0.5 mL和2 mL血浆中测试人体5S什么是基因。

将Norgen的血浆/血清再重复DNA纯化Midi实验化学试剂盒（浆料版式）与Q 公司实验化学试剂盒开始会比较，以评估报告其分离处里高品质血浆DNA的性能，以供 敏感性的上中游用途，如qPCR。当处里0.5 mL和2 mL血浆时，Norgen 图纸（白色）的测序极限速度比竟争竞争者Q的图纸（蓝色）较快，阐明 Norgen图纸中留存许多高品质再重复DNA的收购 率会高。

欧宝体育官方 信息:

Plasma/Serum Circulating DNA Purification Kits (Slurry Format)
50 Preps (Mini)	Cat. 50600
20 Preps (Midi)	Cat. 51200
10 Preps (Maxi)	Cat. 51300

cf-DNA 提取纯化

PLASMA/SERUM CELL-FREE CIRCULATING DNA PURIFICATION KITS 

血浆/ 血清无上皮细胞循环往复DNA纯化免疫试剂盒 (CAT. 55500, D x 55500, 55100, D x 55100, 55600, D x 55600, 55800, D x 55800)

• 可脱离新冠病毒和真菌DNA 
• 具备不一样的血浆和血清输人重量（10 uL - 10 ml） 
• 将再循环 DNA 浓缩造成至可调冲洗掉质量（25 uL - 50 uL） 
• 剥离 的无内部不断循环DNA，不包含阻止剂 
• 15-20半小时内纯化高质理量的DNA 
• 与Streck Cell-Free DNA BCT? 管兼容 
• 纯化研究背景采用Norgen专有光敏树脂破乳栽培基质的离心式柱色谱

从血浆和血清样品中快速简单地纯化各种大小的循环DNA

Figure 1. 从用青金桔酸盐用作抗凝剂搜集的50 uL、100 🦄uL和200 uL血浆中纯化游离于DNA，并与Q有限公司的化学制剂盒参与相当。

取2 uL纯化的DNA做表格模板，在qPCR体现中评价指标纯化的规范5S rRNAdna的取决于的数量。伴随着样本输进量的增强，5S rRNAdna的相 对的数量呈非线性增强。与其它转移手段相对来说，Norgen的化学药品盒凸显出 对规范5S rRNAdna的最同步和最高的的环保再生资源回加标回收率。欧宝体育官方 消息：

Plasma/Serum Cell-Free Circulating DNA Purification Kits
50 Preps (Micro)	Cat. 55500
50 Preps (Micro)	Cat. Dx55500
50 Preps (Mini)	Cat. 55100
50 Preps (Mini)	Cat. Dx55100
20 Preps (Midi)	Cat. 55600
20 Preps (Midi)	Cat. Dx55600
10 Preps (Maxi)	Cat. 55800
10 Preps (Maxi)	Cat. Dx55800

2、cf-DNA/cf-RNA 研究的实验室指南

介绍 

无神经元理论学习分析具备一款多种单纯、周到性且非侵蚀性的检测和理论学习分析最简单的具体方法。利用录入一款快速的的静脉血子样本，理论学习分析人群可不可以检测 恶性肿瘤，体现了未诞生宝宝的特色，还辨别的患病者的大部分遗传病出错。传统艺术最简单的具体方法如活检是非常痛苦且侵蚀性的，但会很有可能会对 患病者对其通过不正确的检测或致使更具的损伤。要想关心您在cf-DNA / cf-RNA理论学习分析中可以获得较大 投资回报，本自动化书具备了试验台指 南，以有效确保正确的最终。从食用欧宝体育官方 的cf-DNA / cf-RNA保持管对其通过录入和搬运到核酸的纯化，竟然以及量测和测序等 在下游用途，Norgen为您的运作过程的每种步具备周到性的克服方案设计。

样本采集和保存 

致使血浆模板中cf-DNA和cf-RNA（总称为无癌细胞酸或cf-NA）的酸度较低（1-100 pg/μL），个人建议一方面确立是需要备考的血 粘液积。而且获得模板，好一个采用无须依赖感EDTA或肝素的血获得管（BCT），而且这二者管都不将会在高出18天 的时内稳定模板，还有就是将会会串扰上游app。不仅，若是以常温（RT）输送，在EDTA或肝素分液漏斗获得的血将始于 溶血，然而不是合采取cf-NA设计。若是不存在保护措施管，应在获得后不高出1天离心法收旧血浆，并在价格区间前将其吸收 在-70°C的干冰面。若是采用了cf保持管，则不是需要注重这一个。

按照其所动用的确保管，血样不错在RT标准下补充7天至30 天，而并不会冒出不好含量的溶血。这对EDTA或肝素管来 说，尽管补充还不到在一天的，总会慢慢冒出溶血。图1凸显了在 Norgen的cf-DNA / cf-RNA贮藏管内收录的血中中溶血的水 平与EDTA和另种商家可要到的血中收录管的相对比较。与 EDTA较之，Norgen管在30天内维持的血浆中赤红淀粉酶（溶血的目标）含量较低，EDTA在两天收录后慢慢凸显清晰的 溶血。综合排名第一的竞争与合作对方在13天后慢慢凸显溶血。

Figure 1. Norgen的cf-DNA/cf-RNA防蚀管、行业竞品的试管和 EDT💦A单管直接的猩红素降解率会比较。猩红素是血癌组织细胞裂解的一款 较好的指标值，根据它在癌组织细胞自杀时被解释放弄出来来，并更具有趣的吸光度等值线。

样本定量和质量确定 

NanoDrop? 议器不常用做评估报告格式血浆中cf-DNA和cf-RNA的重量和数量统计，而且其测验域值为5 ng/μL，比血浆中cf-NA浓 度大出50到5000倍。的使用Bioanalyzer设定好的RNA全部性参数值（RIN）也被除掉当做重量设定好的方式方法，而且它依赖性于细 胞RNA，中应是18S和28S rRNA。若范本量所经相应的治理 和提供，这2个标出物都最好不要产生。若产生以下标出 物，则范本量已被破坏，很很有已经是与溶血有机物光于，因很有已经对cf-NA测验无效的。辛运的是，争对低核酸水平和cf-NA特异形分离出和降钙素原检测，现实存在适合的化学制剂盒和技巧。Norgen供给低丰度DNA和RNA定 量化学制剂盒，迅敏度多达到1 pg/μL比率，甚至会更低。接着的图2屏幕上显示了差异已发现DNA选择量的qPCR统计图表，證明了这有一点。 只需在合适的荧光核酸染剂的輔助下，这样化学制剂盒能够与一点qPCR机系统一切选择。

可使用改良的Quant-iTTM RiboGreen? RNA检测试剂盒来定量cfRNA，而类似地改良的Quant-iTTM PicoGreen? dsDNA试剂盒可 定量cf-DNA。请参阅附♍录以了解协议的修改内容。 Agilent生产的高灵敏度DNA试剂🧔盒可以检测低至5 pg/μL的DNA， 而他们的RNA 6000 Pico Kit 结合Bioanalyzer（图3）使用时，可以 检测到50 pg/μL的RNA。 Bioanalyzer示踪图还可以提供视觉定性 信息。纯样品只会在140-180 bp附近有一个峰，而含有gDNA污染 的样品则在较高bp范围内有第二个宽峰，如图4所示。

Figure 2꧙. 用Norgen的低丰度DNA参考值🌼采血管盒转换的主要性qPCR基线图。增加比较可观察到500 fg区间。

Figure 3. Bioanalyzer示踪图体现cf-RNA的高截获率（约1七个荧光单 位）（A，Norgen血浆/血清cfc-RNA一级纯化化学生化试剂盒），与cfRNA截获🐲率较低的RNA示踪图（约4个荧光组织）（B，竞争者敌手Q 循环法核酸检则化学生化试剂盒）🍷。

Figure 4. Bioanalyzer示踪图表明从Norgen的cf-DNA/cf-RNA储放管 中赚取的纯cf-DNA（蓝色系），经Norgen cf-DNA分离处理实验试剂盒纯化，以 及从家用血浆收集分液漏斗赚取的包含的gDNA环保问题的示踪图（👍红颜色）。污 染示踪图下cf-DNA的增添是因此组织溶解完时尽情释放的核小体。因此其 对应可靠，其是最先见的化学降解DNA内容之三。

仿品的含量也可依据关察Ct值/PCR放入图形的规则化来确保 （图5）。跟随PCR放入的增大，也许 串扰的反应的单质含量也 会增大。Ct值和PCR放入内的敏感负相关联，且无或最低偏限离线 性，表达PCR调节剂的含量较低。调节剂也许 原因溶血而走进样 品，这如前上述也许 使仿品已过期。

Figure 5. 高色度核酸供试品的表示性Ct值/PCR键盘输入图

附录 

 而对于cf-NA酶联免疫法，建意修改游戏Quant-iTTM RiboGreen? RNA检查微生物培养基盒和Quant-iTTM PicoGreen? dsDNA检查微生物培养基盒的方 法是将发应图片缩放至20 μL，并在0.5 mL电子光学透明色管内开始。2，无需选用安利的萃取DMSO交易量的200倍兑水（在TE 中），往往设置成1000倍兑水。提拱的NA规定应按有以下证明准备好：

 1) 对于浓度范围从1 ng/μL到100 pg/μL：

将出具的100 μg/mL RNA规范标准单位的2 μL做好稀释工作至以后体积大概为100 μL，用无核酸酶水稀 释至以后盐浓度为2 μg/mL。这将应用于筹备 规范标准单位。

1X TE (?L)	2 ?g/mL RNA	1000-fold Dilution of RiboGreen? (?L)	Final RNA Concentration
0	10	10	1 ng/?L
5	5	10	500 pg/?L
7.5	2.5	10	250 pg/?L
9	1	10	100 pg/?L

2) 对于50 pg/μL到5 pg/μL的浓度：

将2 μg/mL溶剂的5 μL与95 μL核酸酶优质水希释，提升以后RNA稀硫酸浓度为100 ng/mL，第三需备低于的标准单位溶剂。自然，这也适 主要用于DNA的标准单位。不良反应混合型物由1μL样件、9 μL 1X TE和10μL RiboGreen?或PicoGreen?化学药品形成。

1X TE (?L)	2 ?g/mL RNA	1000-fold Dilution of RiboGreen? (?L)	Final RNA Concentration
0	10	10	1 ng/?L
5	5	10	500 pg/?L
7.5	2.5	10	250 pg/?L
9	1	10	100 pg/?L

3、血浆Small RNA-seq工作流程：

1、分类整理与维持 

c♕f-DNA/cf-RNA Preservative Tube，cf-DNA/c f-RNA 维持管 (Cat. Dx69350, 69350) 

• 在环境温度下储存 cf-RNA、cf-DNA 和 ct-DNA 将近30天 

• 可以防止装运操作过程中的溶血 

• 血浆利用率高 

• 含有规定剂的玻璃钢保鲜剂，无DNA化学交联 

• 与市售的cf-RNA和cf-DNA纯化方式方法兼容 

• 保证代有CE-IVD身份认证的欧宝体育官方 版本升级

	Norgen Biotek	Competitor 1
高温动态平衡存储时限	30 Days	7 Days
溶血率	最小化	显著溶血
血浆回收体积	~5-6 mL	~3-4 mL
固定剂	不含	含有固定剂

2 、RNA 提取纯化

Plasma/Serum RNA Puri?cation Kit ，血浆/血清 RNA 纯化试剂盒 (Cat. 55000, 56100, 56200) 

• 应用Norgen专有的硅胶粘合剂基本材料来纯化RNA 
• 离心分离大多数与蛋清质融入的循环法cf-RNA，属于细胞膜外囊泡的RNA 

• 依照并过柱各个的RNA，究竟其粗细或GC分子量如此，不太老有误差值 

• 不动用承载RNA 
• 不安全使用苯酚或氯仿等的危险有机化学原料 
• 可处置50 uL至5 mL的血浆 
• 纯化的RNA与中下游利用兼容，如qPCR、NGS、微阵列等。

Plasma/Serum Exosome Puri?cation and RNA Isolation Kit 

 血浆/ 血清外泌体纯化及 RNA 提取试剂盒 (Cat. 58300, 58500, 58600)

• 采用Norgen的专利技术光敏树脂基本材料，先纯化外泌体，再纯化RNA。 
• 紧密结合并洗刷各个的RNA，不管是其多少或GC浓度怎么样才能，都不会产生误差值 
• 不选择各种载体RNA 
• 不利用苯酚或氯仿等安全隐患无机化学原料 
• 可整理50 μL至10 mL的血浆 
• 纯化的RNA与中游软件兼容，如qPCR、NGS、微阵列等。

3 . NGS服务 (SMALL RNA 测序) 

Library Preparation: Small RNA Library Prep Kit 

文库制备： 小RNA文库制备试剂盒 (Cat. 63600) 

• 重视超底键盘输入的RNA进行了整合，特别的是来体液的RNA 
• 几斤4八个indices 的能作性 
• 快捷和方便的工作的程序 

测序 

• Illumina app平台 

生物信息分析 

• 安全使用生物体相关信息学数据分析询问转录后改善逻辑 
• 深入分析什么是基因差距展示连接数现新的生物工程标制物 
• 完美的统计数据和会随时可发表文章的图案统计数据

4、无创产前检测NIPT，开放平台工作流程

1. 收集与保存 

cf-DNA/cf-RNA Preservative Tube，cf-DNA/c f-RNA 保存管 (Cat. Dx69350, 69350)

• 在温度下上传 cf-RNA、cf-DNA 和 ct-DNA 历时 30 天 
• 解决办法运输物流的过程中的溶血 
• 血浆收废率高 
• 只含固定不动剂的防腐材料剂，无DNA化学交联 
• 与市售的cf-RNA和cf-DNA纯化办法兼容 
• 提拱含有CE-IVD实名认证的欧宝体育官方 新版本

	Norgen Biotek	Competitor 1	Competitor 2
恒温存为间隔时间	30 days	14 days	最高 10 days
溶血率	面值最小化	显著溶血	低溶血
血浆回收率	~5-6 mL*2	~3-4 mL*2	~5 mL*2
固定剂	不含	含固定剂	不含

References 

a. Ward Gahlawat A, Lenhardt J, Witte T, et al. Evaluation of storage tubes for combined analysis of circulating nucleic acids in liquid biopsies. International Journal of Molecular Sciences. 2019;20(3):704. doi:10.3390/ijms20030704 

b. Maass KK, Schad PS, Finster AM, et al. From sampling to sequencing: A liquid biopsy pre-analytic workflow to maximize multi-layer genomic information from a single tube. Cancers. 2021;13(12):3002. doi:10.3390/cancers13123002

2 . DNA提取纯化 

Plasma/Serum Cell-Free Circulating DNA Puri?cation Kits 血浆/血清无细胞膜循环法DNA纯化化学试剂盒(Cat. 55500, 55100, 55600 and 55900) 

• 灵活运用Norgen平台专有的光敏树脂机质纯化細胞外循环往复DNA 
• 分離因此球蛋白根据的反复cf-DNA 
• 无论是否深浅或GC硫含量怎样，都能截获和过柱一切DNA，不能测量误差 
• 不实用苯酚或氯仿等安全风险化学工业品 

• 可以处理10μL到10 mL的血浆 

• 将DNA冲洗掉到25-50 μL的冲洗掉体型 
• 纯化的DNA与qPCR、NGS等在下游用途兼容

	Norgen Biotek	Competitor 1	Competitor 2
上样量	10 ?L - 10 mL	1 mL - 10 mL	3 mL to 10 mL
洗脱体积	25 ?l - 50 ?l	20 ?l - 80 ?l	35 ?l
填料树脂	专利碳化硅	硅胶	硅胶
需要预浓缩步骤吗？	No	Yes	No
下游应用兼容性	Yes	Yes	Yes
整体优势	Norgen使用碳化硅技术，可以捕 获低浓度的cf-DNA	可以部分自动化	非常快速和简单的协 议
整体劣势	该实验试剂盒不掌握系统自动操作方法的特性。 Norgen的Plasma/Serum cfcDNA高纯化实验试剂盒（Cat. 68000）能构建电脑自动 化，一个较好的会选择。	使用二氧化硅，已被证明 能预先与高GC含量和高 分子量的DNA结合，造成 偏差。	使用二氧化硅，已被证明 能预先与高GC含量和高 分子量的DNA结合，造 成偏差。

3 、文库制备 

Norgen不打造DNA的文库制 备制剂盒，所以，欧宝体育官方 的RNA纯化和DNA脱离制剂盒与一点采用全基 因组测序的商业运作文库提纯制剂盒兼容

4 .测序和数据分析 

拥有了注意好的DNA，能够 展开全 人类基因显性基因组测序来考察全部整个孕期宝宝人类基因显性基因组，以确定好需不需要有任意显性基因出错。 一些有重要性性的具体方法涵盖SNP分折和微阵列

5、客户成功案例： 

Alex Rolland: 使用外泌体 ct-DNA 改善癌症诊断

我的名字是Alex Rolland，我是Cancer Treatment Options and Management Inc.（CTOAM）和Liquid Biopsy Labs的联合创始人和首 席科学家。 

在欧宝体育官方 找从血液循环系统中分离出ct-DNA的制剂盒时，我是第一回次据说Norgen Biotek，时段需花在201八年末/2020年初。欧宝体育官方 当即測試了是非常多的制剂 盒并查看手机了评说，但都并未领取充足的ct-DNA量，就没有办法在TaqmanddPCR平墙上领取结局。Norgen的制剂盒源于离心法技巧，非常容易分离出，并 且默认小形制剂盒使欧宝体育官方 就能够领取可贵的可測試的ct-DNA，之所以我就 Norgen强吸引力！ 

 Norgen是唯独立刻们赚取期许结局的企业。不但，欧宝体育官方 一直以来都在的使用的一种出自于大企业的ct-DNA上传管，它可以欧宝体育官方 从两 个管上赚取2-4 mL的血浆/血清。然后，这种水管接头会存在的问题，Norgen的有一个高级工程师探究学科家意见建议我战胜困难Norgen的管 子。重新，结局使人惊叹，欧宝体育官方 要从6个水管接头中赚取多7-10 mL的血浆/血清。这相关系数的提升了欧宝体育官方 的出产量，并使欧宝体育官方 要完成下一第一阶段的进行。

个人小结一次欧宝体育官方 在Norgen欧宝体育官方 中发觉的优点: 

• 从血官荣获高时产的血浆/血清 

• 从孩子的导入微生物培养基盒中赢得高总产量的胃癌/胚 泡有关系的ct-DNA

Alex Rolland 在钻研中应用的Norgen欧宝体育官方

案例研究

案例1

 1个小肠癌患有在其肿癌DNA测序中发现了PRKDC（肿癌抑 制什么是基因）的有一个未决进化体（VUS）。欧宝体育官方 对其进行了有一个应用于 计算出来机的研究研究分析/字段传统性研究研究分析，的结果提示 这一进化体很可 能是致病性的。法律事实单位证明，欧宝体育官方 接着随后便用它来在线检测此患有的早 期恶变原因，并评价控制目的。

Figure 1. 从患儿全血中获取一个的PRKDC A358T外泌体DNA量。计算误差线表示法95%置信区域（CI）

案例2 

该患者患有晚期乳腺癌，欧宝体育官方 的测序结果显示其PIK3CA基 因发生了突变。当时，用于治疗特定类型乳腺癌的药物 Alpelisib在加拿大尚未获得批准，因此欧宝体育官方 联系了药品制造 商并说服他们提供免费的药物，同时从加拿大卫生部获得 了同情使用权，并使用ct-DNA监测患者的治疗反应。不幸 的是，在这种情况下，患者只能短暂地耐受药物，并不得 不停止使用。正如您所看到的，欧宝体育官方 的测试显示了未经有 益治疗的ct-DNA增加。

Figure 2. 从爱美者全血中提取的PIK3CA P1047L外泌体DNA量。粗差线标识95%置信区段（CI）

真实的科学家，真实的故事，真实的成功！

一、尿液收集&保存

URINE COLLECTION AND PRESERVATION TUBES 尿液浑浊持续与保存图片管 (CAT . 18116 , 18120, 18111, 18129)

• RNA/microRNA/DNA/高蛋白质，可以在室内温度下包存已经超过2年 
• 与通常数DNA、总RNA、microRNA和球营养素拆分最简单的方法兼容 
• 上传剂以单分子量固体图片格式（安瓿）作为 
• 储存图片剂也以变干格局在管内出具 - 尿样提取和储存图片管 
• 尿液浑浊回收利用和导出管有4种利于的尽寸：5 cc管、15 cc管、50 cc管和 120 cc杯

简单且快速地保存尿液样本

Figure 1. Norgen的的尿液保留剂中RNA的维持性

从很多更健康捐送者征集尿中模本并相溶，己经将尿中分开包装到 Norgen的尿中征集和永久留存管（5cc）（Cat.18116）中，永久留存在-20° C、4°C和空调温度下超过24八月大左右。己经选用Norgen的尿中总RNA纯化 Maxi Kit（浆料文件类型）（Cat.29600）从永久留存的尿中中在时0、4个 月、俩八月大左右、4八月大左右、8八月大左右、1俩八月大左右、16八月大左右和24八月大左右后己经离心分离 尿中RNA。

欧宝体育官方 信息：

Urine Collection and Preservation Tubes
1 Tube, 50 Tubes	Cat. 18116, 18118 (5 cc)
1 Tube, 50 Tubes	Cat. 18120, 18122 (15 cc)
1 Tube, 50 Tubes	Cat. 18111, 18113 (50 cc)
1 Cup	Cat. 18129 (120 cc)
1 Tube, 50 Tubes	Cat. 18124, 18126 (防腐剂-单卖)

a. cf-RNA 提取纯化

URINE CELL-FREE CIRCULATING RNA PURIFICATION KITS 

小便无上皮细胞循环系统RNA纯化采血管盒(CAT. 56900, 57000, 57100)

• 250 μL 至 30 mL ，需求好几种尿里上样量 
• 无苯酚浸出 
• 无平台RNA 
• 紧密结合并洗刷因此RNA，大多数规模或GC含碳量怎么样才能，无误差 
• 将反复 RNA 和外泌体 RNA 浓缩提炼成 50 μL 至 100 μL 的便捷冲洗掉量 

• 25 - 30 min 添加纯化高安全性能量 RNA 

• 纯化的RNA支持于一些上中游使用，包涵Small RNA测序 

• 纯化通过施用Norgen专有树酯分开基本材料的离心式柱色谱

分离所有大小的循环和外泌体RNA，包括microRNA

Figure 1. 一直同尿体型中纯化无细胞核循环往复RNA和外泌体RNA。 

安全使用Norgen的小便浑浊无血癌细胞反复RNA纯化小化学试剂盒（索引号56900） 从0.5 mL、1 mL和2 mL小便浑浊样版中纯化无血癌细胞反复和外泌体RNA。 第三，将纯化的RNA中取2微升看做RT-qPCR不起作用的样例，以测试 （A）常用的5S rRNA转录本和（B）miR-21的扩张具体情况。不论是是 （A）5S rRNA转录本更是（B）miR-21的均匀Ct值都不断地样版手机输入 量的添加而规则化避免。

欧宝体育官方 信息：

Urine Cell-Free Circulating RNA Purification Kits
50 Preps (Mini)	Cat. 56900
20 Preps (Midi)	Cat. 57000
10 Preps (Maxi)	Cat. 57100

URINE EXOSOME PURIFICATION AND RNA I SOL ATION KITS 

尿夜外泌体纯化和RNA分离处理微生物培养基盒 (CAT. 58400, 58700, 58800)

a. 不论什么面积大小或GC分量，都要以紧密联系和冲洗掉全部的RNA，找不到误差值 b. 分离出来各个规模的外泌体RNA，有microRNA c. 可调的小便放入量（250 ?L至30 mL） d. 不需苯酚提纯，血清酶K清理或各种载体RNA 

e. 不需要耗时的超速离心，过滤或特殊注射器 

f. 不需要沉淀试剂或过夜孵育 

g. 与任何物种的尿液兼容 

h. 纯外泌体被纯化并且不含任何其他RNA结合蛋白

i. 纯化鉴于用到Norgen专有不饱和树脂转移基本材料的飞速转动柱层析

完善尿外泌体的纯化和聚集，满足了的功能探索业务需求

Figure 1. 从来都不同排尿量中纯化的外泌体中离RNA。 选择Norgen的尿里外泌体纯化和RNA拆分采血管盒（Cat. 58800）选择相似的采血管盒绝不同尿液中纯化外泌体，并分 离RNA。然后，选择拆分的RNA的2微升当做RT-qPCR现象 中的钢板，监测拆分的尿外泌体miR-30a的扩张情形。（A） 时间推移欧宝体育官方 的样品插入量的曾加，尿外泌体miR-30a呈线型变低趋 势。B）尿外泌体miR-30a的比量体现出优秀的线型干系， 环保再生资源回产出率少于90％。

欧宝体育官方 信息：

Urine Exosome Purification and RNA Isolation Kits
50 Preps (Mini)	Cat. 58400
25 Preps (Midi)	Cat. 58700
15 Preps (Maxi)	Cat. 58800

b. cf-DNA 提取纯化

URINE CELL-FREE CIRCULATING DNA PURIFICATION KITS 

 尿里无血细胞巡环DNA纯化微生物培养基盒(CAT. 56600, 56700, 56800)

溶合病毒样本DNA 适宜于不同的体积大概的小便输出（250 ?L - 30 mL） 将嵌套循环DNA高浓到灵活多变的过柱质量分数区域内（50 ?L - 100 ?L） 提取的内部外循坏DNA，无仰溶液剂 15-20min，即得高品性能DNA 与Norgen的尿水另存剂和各种市售尿水另存剂兼容 纯化依据在使用Norgen专有的树脂胶拆分基本材料的翻转视频柱色谱法。

从新鲜、保存或冷冻的尿液样本，分离出所有大小的循环DNA

Figure 1. 在测量人间5S人类基因时，认定尿样神经细胞自由DNA样品中的抑 制量。

 

适用Norgen的小便组织细胞游离态DNA纯化Maxi微生物培养基盒（规格型号56800）， 从10 mL、20 mL和30 mL小便中分发型离DNA。在20 ?L的qPCR想法中 适用不一样体型大小大概的洗刷物（2、4和8 ?L），看Ct值会不有减掉。随 着模版量的加大，Ct值的加大将清晰是因为样例中发生PCR阻止剂。 在qPCR中适用不一样洗刷工件积大概算作模版并不导致由qPCR提取的Ct 值。观点上，Ct值取向于跟随着PCR读取体型大小大概的加大而减掉，是因为使 用Norgen微生物培养基盒纯化的小便中的DNA可含一般 发生于小便中的常用 阻止剂。

Urine Cell-Free Circulating DNA Purification Kits
50 Preps (Mini)	Cat. 56600
20 Preps (Midi)	Cat. 56700
10 Preps (Maxi)	Cat. 56800

2、尿液 Small RNA- Seq 工作流程

1、 收集与保存 

Urine Collection and Preservation Devices - 5cc, 15cc, 50cc, 120cc, single dose， 

• 尿液浑浊分类整理与包存管 (Cat. 18118, 18122, 18113, 18126, 18129) 
• 供应多种类外形尺寸的访客合理型他们的尿液采集而来设施 
• RNA/microRNA/DNA/蛋清质就能够在室内温度下手机截图多于2年 
• 兼容商业服务化的cf-RNA纯化办法 
• 在车辆运输尿夜时，需要在恒温的下上传游离子大团伙、脱落神经细胞和微菌物

	Norgen Biotek	Competitor 1	Competitor 2
室温保存时长	2 年+	7 天	30 天+
使用简便	Yes	No	No
保存的生物标志物	cf-DNA, cf-RNA, exosomes, proteins	DNA and RNA	DNA and RNA

2、RNA转化成纯化 

Urine Cell-Free Circulating RNA Puri?cation Kit，

的尿液无肿瘤细胞不断循环RNA纯化微生物培养基盒 (Cat. 56900, 57000, 57100) 

• 利于Norgen的专有环氧树脂栽培基质纯化癌细胞外巡环RNA 

• 分开因此核蛋白结合在一起的不断循环cf-RNA，还包括内部外囊泡的RNA 

• 而是尺寸或GC占比，都能结合在一起和冲洗掉拥有RNA，没偏激 

• 不安全使用的载体RNA 

• 不用到风险化学上品，如苯酚或氯仿 

• 可不可以进行处理250 ?L到30 mL的尿中 

• 纯化的RNA与在下游用（如qPCR、NGS、微阵列等）兼容。

Urine Exosome Puri?cation and RNA Isolation Kit， 

尿夜外泌体纯化和RNA分离法制剂盒 (Cat. 58400, 58700, 58800)

3 . NGS的服务 (SMALL RNA 测序) Library Preparation: Small RNA Library Prep Kit 

文库制备： 小RNA文库制备试剂盒 (Cat. 63600) 

• 而对低好手机输入的RNA参与了调优，还是比较是位于体液的RNA 

• 有4七个indices 的可以选择性 

• 最快和简单的作业流量

测序 

• Illumina 网站

生物工程个人信息深入分析

• 经过菌物问题学解析来体谅转录后政策调控 

• 体检文化差异体现潜在现新的动物标准物 

• 完整版的申请书和立刻可刊发的图文消息数据文件

三、稿件 / PUBLICATIONS

1. From Sampling To Sequencing: A Liquid Biopsy Pre-Analytic Workflow To Maximize Multi-Layer Genomic Information From A Single Tube //www.mdpi.com/2072- 6694/13/12/3002 

2 . Evaluation of Storage Tubes for Combined Analysis of Circulating Nucleic Acids in Liquid Biopsies //www. mdpi.com/1422-0067/20/3/704 

3 . Comprehensive evaluation of methods to isolate, quantify, and characterize circulating cell-free DNA from small volumes of plasma //link.springer.com/article/10.1007/s00216-015-8846-4 

4 . Effect of microRNA GC Content on RNA Purification Efficiency (App Note made by Norgen) //norgenbiotek. com/sites/default/files/resources/plasma_serum_circulating_ and_exosomal_rna_purification_kit_slurry_format_effect_of_ microrna_gc_content_on_rna_purification_efficiency_application_notes_465_0.pdf 

5 . Comparison of Four Commercial Kits for Isolation of Urinary Cell-Free DNA and Sample Storage Conditions // www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7236016/ 6 . Measurement Biases Distort Cell-Free DNA Fragmentation Profiles and Define the Sensitivity of Metagenomic Cell-Free DNA Sequencing Assays //academic.oup.com/clinchem/ article/68/1/163/6410769?login=false