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细胞质和细胞核RNA提取试剂盒

Cytoplasmic & Nuclear RNA Purification Kit

 

货号：21000

悬浮细胞和被提起悬浮的细胞（For cells growing in suspension and lifted cells）

 

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• 你好英语，您无法观看影片Norgen Biotek。今天小编，欧宝体育官方 将出示关与内部质和内部核RNA纯化生化试剂盒（欧宝体育官方 货号：21000）的逐步作业工作流程的训练技巧，该训练技巧适合于在悬屏内部和被递交悬屏的内部。
• 想要避免出现土样污染破坏，觉得在逐渐前先用1%的脱色剂清洗事业空间区域和分析仪器，如果70%酒精擦洗。
• 您的免疫试剂盒包含：简略的欧宝体育官方 规格书怎么写书，Lysis Buffer J（裂解储存液J），Buffer SK（储存液SK），Wash Solution A（洗衣机清洗液A），Elution Buffer E（过柱液E），Spin Columns（离心分离柱），Collection Tubes（收录管）和1.7 mL Elution tubes（1.7 mL过柱管）。
• 在慢慢前，保证把Lysis Buffer J放至-20℃的冰箱保鲜中10到14多分钟，并在操作前拿出。这时为着保证内部质和内部核RNA的隔离。

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第1步：细胞组分的制备

Step 1: Cell Fractions Preparation

01:02~02:55

1. 将细胞悬液转移至无RNase的试管，并以不超过200 g或2000 RPM的速度离心10分钟以沉淀细胞。0🌃1:16~01:23

2. 心倒出上清液。只为确保安全滤渣物物没有掉下来，有机会会在滤渣物物中留有几微升的锻炼基。
3. 在滤渣添加入200 uL阴冷的Lysis Buffer J。
4. 采用涡旋压缩机15秒来裂解细胞膜。在实施下一点的时候，请狠抓这个乳浊液充分融化。动用移液器将裂解液移转至无RNase的轻微抽滤管。
5. 在台式一体机离心法机中以很大网络速度缩放裂解液10分。
6. 动用可能含有小枪头的移液器，将包括肿瘤细胞质RNA的上清液更换至另外一只个无RNase的试管。
7. 内部结构核RNA多混合物（沉淀物中出的）尤其胶状，可能会很疏松，由此，过强意见和建议便用较小的移液器枪头来移动内部结构质一地方，解决将内部结构核RNA多混合物（沉淀物中出的）移出去或移动到内部结构质一地方中。
8. 这样需求导出组织内部结构RNA，则使用有组织内部结构RNA的发展。
9. 为了让确保安全石雕文化沉淀出的微球不被移出去，可不可以在石雕文化沉淀出的物中留着几微升的Lysis Buffer J。即刻继读执行工作布骤2。

02:58

第2A步：将细胞质RNA与柱结合

Step 2A: Binding Cytoplasmic RNA to Column

 

03:02~03:43

1. 向前走那步的上清液（受损细胞质RNA成分）里添加入200 ?L Buffer SK。涡旋压缩机混合着10秒左右。
2. 向混后物里添加入200 uL 96-100％无水乙醇。涡旋压缩机混后10s。
3. 将混和物加到已与收录管拼装在一同的离心力力柱上，即为3500 g或6000 RPM离心力力两分钟。
4. 遗弃循环液，立即制做离心分离柱极其自身管。

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第2B步：将细胞核RNA与柱结合

Step 2B: Binding Nuclear RNA to Column

 

03:48~04:27

1. 将400 uL Buffer SK增长到奠定（体细胞结构RNA成分）中。涡流搭配10几秒钟。
2. 向混合式法物内加入200 uL 96-100％工业乙醇。涡旋压缩机混合式法10几秒钟。
3. 将混合法物加到已与抽取管装配在分着的二个离心法式柱上，仅以3500 g或6000 RPM离心法式5分钟。
4. 丢掉分销液，如何按装离心式柱下列关于收录管。

04:29

第3步：柱洗

Step 3: Column Wash

 

04:32~05:04

1. 将400μL Wash Solution A倒入离心分离法柱并离心分离法5分钟。
2. 放弃零售液。多个这一种方法步骤俩次，共计洗3次。
3. 转动抽滤柱2分钟的英文，以根除吹干环氧树脂。抛弃分类整理管。

05:06

第4步：RNA洗脱

Step 4: RNA Elution

 

05:08~05:33

1. 将离心力式柱倒出化学试剂盒中展示 的新的1.7 mL过柱管内。将50 uL Elution Buffer E加到离心力式柱中。

2. 以200 g或2000 RPM离心式力2min，并且以14000 g或🌺14000 RPM离心式力1min。

05:36

第5步：RNA的保存

Step 5: Storage of RNA

 

05:39~05:49

纯化的RNA供试品也可以在–20°C下储存多久。意见供试品应置入–70°C确定不断储存。

感谢您观看本教程，希望这个操作指南能够帮助到大家，如果你喜欢这个视频，欢迎大家踊跃分享它。