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流式细胞术精液检测分析试剂盒

发布者:欧宝体育官方 科技    发布时间:2021-03-22     
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       精子性能检查是疾病诊断女性不孕不育的很重要伎俩,精夜的长规分折费时费事,检查性能指标多ꦚ元化,只可以表示出精子的特性特点和有限制的的的功能,无非最准且全面、明确的表示出精子性能。


   &nb🍸sp;   流式组织肿瘤神经元术组织肿瘤神经元术(flow cytometry,FCM)是在组织肿瘤神经元团伙标准上能够 单克隆抗体阳性对一个组织肿瘤神经元或某个生物制品阿尔法粒子来多基本技术参数、短时间的降钙素原检测定性解析解析。将FCM代替精水定期检查,可把定性解析的详情缓冲间到降钙素原检测的设计,并可来数截至目前表格统计表格,很大延长了研究然而的科学技术性,且可对精水来高通芯片量、多基本技术参数定性解析解析,能大程度的户外拓展培训精子学这一个生植部分的子邻域。


流式细胞术


   &nbౠsp;  普鲁士蓝染色血细胞膜术论述专家组EXBIO可能提供普鲁士蓝染色血细胞膜术爱液测试定量分析化学药品盒,从爱液的多数据坡度鉴定精子的效果:


货号ED7079
规格25 tests
名称SpermFlowEx Kit,依据免疫印迹肿瘤细胞术男人精液监测分析一下制剂盒
说明基于流式细胞仪分析人精液中的以下参数:
精子计数;
白细胞计数;
精子存活率;
精子顶体完整性;
精子中顶端体蛋白;
(应根据WHO的建议,使用光学显微镜检查精子活力和形态)
组分1. Intra-acrosomal protein FITC, 0.5 ml(货号:ED7079-1)
2. CD45 PE-Cy5, 0.25 ml(货号:ED7079-2)
3. Fluorescent Count Standard, 2.0 ml(货号:ED7079-3)
4. Propidium Iodide, 0.25 ml(货号:ED7079-4)
5. Permeabilizing Solution, 25 ml(货号:ED7079-5)
说明书
欧宝体育官方 图

SpermFlowEx Kit


      因为该化学试剂盒,各评价指标主要♐参数的处里与了解下面的:


    (一)精液中精子及白细胞计数


      白生殖组织是精水上常见的1种生殖组织。白生殖组织可经由夺取用途、会产生活力性氧,分🉐秘些生殖组织分子等前提条件诱导型生殖组织凋亡,促使精子规模减小。研究探讨出现 ,白生殖组织计算长高与精子技术指标(其中包括导热系数)的有效降低的存在非常明显重要性性。FCM查重工具是据白生殖组织所表现的双方抗原,用通过荧光颜料的单克隆免疫抗体CD45标识白生殖组织做查重工具,相对于可以镜检、过腐蚀物酶染料等相关查重工具有效途径,FCM可准确性分清白生殖组织与生精生殖组织,的操作꧃便捷,最后牢靠,且可进步骤分清白生殖组织各亚群。


      操控过程:


      1.产🐽生50ul做好稀释工作好的男性♔精液至试管上

&nbs🎉p; &nbsဣp;   2.加10ul CD45 PE-Cy5表面抗原稀硫酸

  🔥;    3.混合型仿品,在常温下孵育20一分钟

      4.加50ul荧光运算基准液(应先,将基准液混合法均匀分布,加🌼少量到不脏💯的微分液漏斗,后来用移液器从微分液漏斗汲取脱贫攻坚空间的基准液加到精子范本管)

  💝;    5.加5ml PBS,搭配后上流式神经细胞仪


精液中精子计数

PE-Cy?5.png

1.爱液中精子计数器2.男性精子中白血细胞运算
将测定统计数法据大信息可视化为点图,中间FITC荧光抗压强度在X轴上,前向散射(FSC)在Y轴上。 如同如图是布置门:门A:各种体细胞,门B:精子,门C:荧光计数法规范标准品(荧光微珠)将门A可视化管理为点图,这里面X轴表达PE-Cy?5活性染料的荧光承载力,Y轴表达侧向散射(SSC)。与精子反之,白血细胞核是CD45弱阳。 应用门D辩别白血细胞核。


      使用以下公式进行精子和白细胞的计数:

精子和白细胞的计数

      S:男性精子中的精子数

 &🍨nbsp;    L:男人的精子中的白神经元数

      𓆏;ܫGate B: B门中的event count值

      Gate 🐽C: C门中的event count值

 ♈;     Gate D: D门中的event count值


    (二)精子存活率

      PI (碘化丙啶, Propidium Iodide)是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂,是一种溴化乙啶的类似物,在嵌入双链DNA后释放红色荧光。尽管PI不能通过活细胞膜,但却能穿过破损的细胞膜而对核染色,只有没有活力的精子才会被碘化丙啶溶液染色。因此用FCM结合DNA荧光染料PI,可以反映出精子的存活率。

控制关键步骤:


    🌊; 1.ꦇ吸取教训50ul稀释溶液好的爱液至试管上

     2.加10ul PI饱和溶液

     3.混后均匀分布,在常温下孵育20分种

 &n💝bsp; &nಌbsp; 4.加0.5mlPBS,混后上流式癌细胞仪


      然而


精子细胞设门

精子存活率

3.精子细胞设门4.精子盈利率


      将测定数据文件多维分析为前向散射(FSC)与侧向散射(SSC)点图。 如同3已知,在精子细胞周设门。其次在直方图示多维分析精子细胞(图4),里面X轴数字象征着PE-Cy5或PerCP渠道中碘化丙啶的荧光效果。使用的尽量的门分开呈呈阳性和阴精子细胞。 阴年龄层象征着有潜能的精子,而PI呈呈阳性年龄层则象征着无潜能的精子。 精子的生🦩存游戏下载率由整个精子细胞含有潜能的精子的费率数字象征着。


    (三)顶体完整性和顶端体蛋白的存在


      在受精步骤中,母乳喂奶动物界刚射出去的精子在人体内要由获能和顶体症状,才能够穿入卵上皮细胞并和协同,结束受精。之所以检则精子的顶体心态,可൲进一步投诉精子的受精技能。精子上方体核血清质(intra-acrosomal protein),是一个种在较为成熟精子的顶体膜上特情人展现方式的核血清质,该核血清质在可以说其他人们精子样例都能被检则到,且展现方式量动态平衡。运用标示了FITC荧光素的上方体核血清质免疫抗体,特情人地标示在顶体膜上,其荧光抗拉效果可投诉顶体大小不一,之所以根据测试荧光抗拉效果可间接的投诉顶体设备构造的完正性。


     操作的方法流程-顶体的全面性


     1.产生50ul兑水好的精子至试管上

 🌞    2.加1 ml PBS,混合法后,150 g离心法分之五钟,去上清

     3.再洗以此(相同方法2)

  &nbs☂p;  4.向水解中放10ul Intra-acrosomal protein  FITC抗体阳性

     5.相混透亮,在恒温下孵育20钟头

 &nb🌄sp;   6.加0.5m🌄lPBS,相溶后上流式生殖细胞仪


      操作步骤-是否存在Intra-acrosomal protein(需透化


   &nb⛎sp; 1.吸走50ul配制好的男人的精子至试分液漏斗

     2.加1 ml侵入液

     3.混合型喂养不均,制冷下孵育14分

     4.150 g离心式分之五钟,去上清液

     5.向石雕文化沉淀物里添加入1 m🍨l PBS,结合均衡,以150 g离心力分之五钟

     6.再洗每次(按顺序步数5)

    🐎 7.注入10 ul Intra-acrosomal protein  FITC表面抗原

     8.多方面混匀,室内温🎐度下孵育三十分钟左右

 &𓆏nbsp;   9.加5mlPBS,混合物后上流式上皮细胞仪


     毕竟


非透化,非病理性精子

透化的非病理性精子

非透化病理性精子

5.非透化,非方面的问题性精子6.透化的非病症性精子7.非透化疾病性精子


     交互效果免疫抗体(底下体核血清FITC)对可固化和未固化原辅料染料的前向散射(FSC)与侧向散射(SSC)点图,并在精子边上设门,如下图图示3图示。之后在直方图里交互效果精子欧宝体育官方 (见图5-7),进来X轴说明荧光难度 在FITC荧光在线检测仪中。 用到相应的门将阳型反应和呈阴性化精子连在一起。 图5显现了阳型反应精子硫纯度低(<30%)的未透化非病检报告学性精子欧宝体育官方 。 呈阴性化象征着有着全部顶体的精子,阳型反应象征着有着破环的顶体的精子。图6显现了固化性非病检报告学性精子,进来阳型反应精子占为主社会价值。 阳型反应精子说明发生底下体核血清。图7显现了未固化的病检报告学性精子,进来顶体破环的阳型反应精子的硫纯度高(> 30%)。


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