T4 DNA联接酶（T4 DNA ligase）的重点功效是联接DNA原子的问题端。在DNA粘贴、从组或休复的过程 中，DNA链几率会发生问题或激光开口，T4 DNA联接酶也可不可以促使DNA原子的5'磷酸基和3'羟基互相的磷酸二酯键导致，若想将DNA情节联接起來，这样于生物技术体界的“502”。除去联接DNA原子的问题端，T4 DNA联接酶还可不可以全封单链RNA或DNA/RNA有性杂交育种链中的激光开口，因在休复RNA或DNA/RNA有性杂交育种链的问题时一定会推动做用。T4 DNA联接酶就是种比较重要的酶，在原子生物技术体学研究探讨和染色体工程项目app中推动着重要的的做用，用作联接DNA情节、打造从组DNA原子和休复DNA问题等。

Biogradetech的T4 DNA接连酶由挟带T4噬菌体gene 30的肠道杆菌制造。该酶催化剂的作用双雷韵DNA或RNA中的5'-磷酸基团和3'-羟基中构成磷酸二酯键。该酶在双链DNA、RNA 还有DNA/RNA结合物间可维修单链缺刻，另外会接连有消费黏性后部还有平后部的DNA片断，但这对单链核酸无生物，主要的用在控制性内切酶酶切有机物DNA片断克隆、表观遗传定时变化与 PCR有机物克隆、线形DNA自环化与维修双链DNA缺刻。T4 DNA Ligase必须要 ATP 用于辅助软件分子，在恒温下达到消费黏性后部接连生理反应仅需10分。

欧宝体育官方 Fast T4 DNA Ligase 欧宝体育官方:很快T4 DNA无线连接酶：

货号 C-BSM205-1000U

各称 Fast T4 DNA Ligase 迅速T4 DNA接入酶

类物质 T4 DNA Ligas🔯e(Fast) (5 U/ul) &nb෴sp;200ul 10×T4 DNA Ligase Buffer    1ml 50% PEG                  1ml

Fast T4 DNA Ligase 更快T4 DNA接连酶应用工艺：

1.DNA 复制到电影片段进行联系至媒介DNA（黏力未端进行联系）

① 于冰上运动配比如下图所示发生反应体系中：

生化试剂 的使用量

直线化媒介 DNA 20~100 ng

放入电影精彩片段 DNA 3:1~10:1 (电影精彩片段：的载体摩尔比)

10×T4 DNA Ligase Buffer 2 ul

T4 DNA Ligase 1U (0.2 ul)

Nuclease-Free Water To 20 ul

② 彻底的混匀并瞬离，22℃温育10 min；

③ 取1~5 ul的接连乙酰乙酸用来50 ul化学工业感慨态内部的转成，还有取1~2 ul用来50 ul电转感慨态内部的转成。 &n๊bsp;

2.DNA插入图情节联接至平台DNA（平末段联接）

① 于雪上制备下述反映管理体制：

制剂 含量

平滑化形式 DNA 20~100 ng

进到这一领域细节描写 DNA 3:1~10:1 (细节描写：承载摩尔比)

10×T4 DNA Ligase Buffer 2 ul

50% PEG 2 ul

T4 DNA Ligase 5U (1 ul)

Nuclease-Free Water To 20 ul

② 充足混匀并瞬离，22℃温育1 h；

③ 取1~5 ul的接触欧宝体育官方 代替50 ul生物学知道态体癌细胞的还原成，以及取1~2 ul代替50 ul电转知道态体癌细胞的还原成。  

3.曲线DNA自环化

① 于冰里标定如表反應体系中：

微生物培养基 用药量

曲线化形式 DNA 10~50 ng

10×T4 DNA Ligase Buffer 5 ul

T4 DNA Ligase 5U (1 ul)

Nuclease-Free Water To 50 ul

② 彻底清除混匀并瞬离，22℃温育10 min；

♉③ 取 1~5 ul的进行连接物质主要使用在50 ul物理感觉态細胞的转成，并且取1~2 ul主要使用在50 ul电转感觉态細胞的转成。  

4.进行连接管进行连接

双链寡核苷酸插头长期被使用在复制到场面描写上引起沾性尾部。插头通 常💞包括规定酶正常识别位点，在联接后经酶切治疗ꦯ引起和克隆各种质粒载体适应的粘端。时常候插头已包括与克隆各种质粒载体适应的粘端，此情此景不能不在插头联接完 成后进行复制到场面描写的进步治疗。

采血管 摄入量

平滑化膜蛋白 DNA 100~500 ng

磷碱化金属接头 1-2 ug

10×T4 DNA Ligase Buffer 2 ul

50% PEG 2 ul

T4 DNA Ligase 2U (0.4 ul)

Nuclease-Free Water To 20 ul

② 彻底消除混匀并瞬离，22℃温育10 min；

③ 在65℃使用10 min并且70℃使用5 min，实施热降解。   

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