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表观遗传之RNA甲基化——m6A甲基化

发布者:欧宝体育官方 科技    发布时间:2020-10-15     
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表观遗传之RNA甲基化

 

      前面给大家讲了DNA甲基化,D🎃NA甲基化是通过DNA甲基转移酶在胞嘧啶环的第5个碳原子上共价加成甲基而产生的,从而产生5-甲基胞嘧啶(5-mC)。那么什么又是RNA🌟甲基化呢?

 

       一 RNA甲基化相关概念

 

 

      RNA甲基化是RNA的可逆翻译后修饰,其表观遗传地影响许多生物过程。它发生在不同的RNA中,包括tRNA,rRNA,mRNA,tmRNA,snRNA,snoRNA,miRNA和病毒R𒆙NA。不同的RNA-甲基转移酶具备相应的催化策略,用☂于RNA甲基化。

 

RNA甲基化

 

      RNA甲基化主要的修饰类型有两三💯种:一种是6-甲基腺嘌呤(m6A),是在存在于真核生物的RNA分子中最常见的和丰富的甲基化修饰和占所有RNA甲基化的80%以上。它可以被称为“第五RNA碱基”并且在调节胚胎发育和细胞命运中具有广泛的作用。

 

6-甲基腺嘌呤(m6A)

 

 &nbs📖p;    另一🃏种是5-mC,5-甲基胞嘧啶(5-mC)是一种表观遗传标记,通常也出现在各种RNA分子中。有证据表明,RNA胞嘧啶甲基化会影响各种生物学过程,例如RNA稳定性和mRNA翻译。

 

5-mC

 

&nbs𓂃p;     最后一种是m1A RNA甲基化,🦩它普遍存在于非编码RNA和mRNA中。m1A RNA甲基化功能,目前发现tRNA上发生多种m1A修饰,可能参与翻译调控。

 

    ꦇ;  今天就跟大家讲讲RNA m6A甲基化。

 

       二 m6A甲基化

 

 

      N6-甲基腺苷(m6A)-真核生物中存在的RNA分子中最常见和最丰富的甲基化修饰。 被称为“第五个RNA碱基”的m6A RNA修饰是可逆的,高度动态꧅的,并且可能起着与DNA甲基化和组蛋白修饰相当的重要生物学作用。

 

      Epigentek可提供m6A研究相关的欧宝体育官方 ,主要有m6A RNA定量试剂盒,甲基化酶和去甲基化酶活性/抑制剂分析试剂盒,以及相关的抗体。

 

【进行规范】m6A RNA甲基化酶联免疫法判断化学试剂盒(cat#P-9005)

 

     🅷 【1】m6A RNA甲基化定量检测试剂盒

 


EpiQuik m6A RNA Methylation Quantification Kit (Colorimetric)
Cat #P-9005
EpiQuik m6A RNA Methylation Quantification Kit (Fluorometric)
Cat #P-9008
MethylFlash Urine N6-methyladenosine (m6A) Quantification Kit (Colorimetric)
Cat# P-9015
为的ELISA样检侧,系统设计吸光度的RNA化学发光法N6-甲基腺苷ELISA样检验,对于荧光参考值RNA中的N6-甲基腺苷ELISA样检则,特征提取消化法定假期量他们的尿液样件中RNA N6-甲基腺苷
最为关键的点1. 检测任何物种中的m6A RNA甲基化
2. 使用m6A抗体的比色ELISA样测定
3. 检出限低至10 pg m6A
1. 检测任何物种中的m6A RNA甲基化
2. 使用m6A抗体的荧光法测定
3. 检出限低至5 pg m6A
1. 检测人类和动物尿液中的总尿m6A 水平
2. 使用m6A抗体的比色ELISA样测定
3. 检出限低至0.01 ng/assay well
开始材质总RNA总RNA排尿
最低标准输人量50 pg50pg5ul
总测时常< 4 hours< 4 hours< 4 hours
反應数48,9648,9648,96
的形式96-Well Plate96-Well Plate96 strip-well

 

&🌃nbsp;     【2】Epigenase m6A甲🐻基酶活性/抑制分析试剂盒

 


Epigenase m6A脱甲基酶活力性/仰制分享制剂盒(比色)cat# P-9013Epigenase m6A甲基化酶活力性/限制解析采血管盒(比色)cat# P-9019
基本原则用在特征取出吸光度的核取出物或纯化酶中总m6A去甲基酶催化活性/抑制性的量测应用于立于吸光度的核取出物或纯化酶中总m6A甲基化酶生物/能够抑制的检测
关键性点1. 检测多种物种中的m6A RNA去甲基化酶活性/抑制分析检测(哺乳动物,植物,真菌和细菌)
2. 使用m6A抗体的比色ELISA样测定
3. 检出限低至2ug 核提取物和50ng纯化的酶
1. 检测多种物种中的m6A RNA甲基化酶活性/抑制分析检测(哺乳动物,植物,真菌和细菌)
2. 使用m6A抗体的比色ELISA样测定
3. 检出限低至2ug 核提取物和50ng纯化的酶
起至的原材料核提炼物和纯化的酶核分离出来物以及纯化的酶
总测时限<5h<4h
类型96-Well Plate96-Well Plate

 

      【3】m6A RNA甲基化抗体

 
货号产商品编码称使用宿体来源地不起作用性
A-1801N6-methyladenosine (m6A) Polyclonal AntibodyDB, ELISA, IF, IP, MeRIPRabbitBroad Range, Human, Mouse
A-1802N6-methyladenosine (m6A) Monoclonal Antibody [2H6]DB, ELISA, IF, MeRIP, NucleotideArrayRabbitBroad Range, Human, Mouse, Rat

The N6-methyladenosine (m6A)

  🦂    图左:The N6-methyladenosine (m6A) Polyclonal Antibody tested in dot blot against total RNA of Arabidopsis

      图右ELISA performed at1:1000 dilution usingN6ꦰ-methylad꧑enosine (m6A) Polyclonal Antibody

 

The m6A rabbit monoclonal antibody

      图左:The m6A rabbitꦗ monoclonal antibody was tested in Dot Blot a🅘gainst N6-methyladenosine (m6A) and unmodified adenosine.

  &🐎nbsp;   Oligomer 8 -ATAACTGG-m6ACCGAATGG

   &nbsꦯp;&🐼nbsp; Oligomer 9 -ATAACTGGACCGAATGG

  &𓂃nbsp;   Oligomer 10 🎃-AAAAAAAAAAAAAAAAbiotin.

      图右:U2OS cells pre-treated with BrdU were subjected to UVC irradiation incubated at 37 &deg;C for the indicated time, and stained for N6-methyladenosine (m6A) Monoclonal Antibody. DAPI, 4&am🎀p;rsquo;, 6-diamidino-2-phenylindole. Global UVC irradiation exceed cytoplasmic level, peaking at 2 min after irradiation and diminishing over the following 8 min.

 

      【4】MeRIP & m6A-seq欧宝体育官方

 

      通过富集存在少量m6A的部分基因组来鉴定m6A修饰。 然后通过构建文库,为下一代测序准备这些片段。 欧宝体育官方 独特的方法称为CUT&RUN RNA m6A富集(在目标下切割,并使用核酸酶富集RNA m6A进行回收),仅在抗体结合位置分离RNA片段,同时在目标下捕获和切割。 这种简化的过程仅需几个小时即可将RNA提取到cDNA文库。

 

      p-9018 EpiQuik CUT&RUN m6A RNA Enrichment Kit :基于🧔CUT&RUN的𝔉MeRIP可提高特异性和信号。

      p-9016 EpiNext CUT&RUN RNA m6A-Sꦆeq Kit:基于CUT&RUN的一体式MeRIP和NGS库准备。

 

      参考文献:

    &💝nbsp; Ts❀uruta K. et. al. et. al. (September 2020). Biocheꦰmical and Biophysical Research Communications. 530(1)  p-9005

 ♐     Zeng M et. al. (August 2020). 753:144810. p-9008

 

      以上就是今天的全部内容了啦~~

 

      下期预告:RNA甲基化&mdash;&mdash;5mC甲基化,大家敬请期待噢~~


 

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