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前面给大家讲了DNA甲基化,D🎃NA甲基化是通过DNA甲基转移酶在胞嘧啶环的第5个碳原子上共价加成甲基而产生的,从而产生5-甲基胞嘧啶(5-mC)。那么什么又是RNA🌟甲基化呢?
一 RNA甲基化相关概念
RNA甲基化是RNA的可逆翻译后修饰,其表观遗传地影响许多生物过程。它发生在不同的RNA中,包括tRNA,rRNA,mRNA,tmRNA,snRNA,snoRNA,miRNA和病毒R𒆙NA。不同的RNA-甲基转移酶具备相应的催化策略,用☂于RNA甲基化。
RNA甲基化主要的修饰类型有两三💯种:一种是6-甲基腺嘌呤(m6A),是在存在于真核生物的RNA分子中最常见的和丰富的甲基化修饰和占所有RNA甲基化的80%以上。它可以被称为“第五RNA碱基”并且在调节胚胎发育和细胞命运中具有广泛的作用。
&nbs📖p; 另一🃏种是5-mC,5-甲基胞嘧啶(5-mC)是一种表观遗传标记,通常也出现在各种RNA分子中。有证据表明,RNA胞嘧啶甲基化会影响各种生物学过程,例如RNA稳定性和mRNA翻译。
&nbs𓂃p; 最后一种是m1A RNA甲基化,🦩它普遍存在于非编码RNA和mRNA中。m1A RNA甲基化功能,目前发现tRNA上发生多种m1A修饰,可能参与翻译调控。
 ꦇ; 今天就跟大家讲讲RNA m6A甲基化。
二 m6A甲基化
N6-甲基腺苷(m6A)-真核生物中存在的RNA分子中最常见和最丰富的甲基化修饰。 被称为“第五个RNA碱基”的m6A RNA修饰是可逆的,高度动态꧅的,并且可能起着与DNA甲基化和组蛋白修饰相当的重要生物学作用。
Epigentek可提供m6A研究相关的欧宝体育官方 ,主要有m6A RNA定量试剂盒,甲基化酶和去甲基化酶活性/抑制剂分析试剂盒,以及相关的抗体。
【进行规范】m6A RNA甲基化酶联免疫法判断化学试剂盒(cat#P-9005)
🅷 【1】m6A RNA甲基化定量检测试剂盒
EpiQuik m6A RNA Methylation Quantification Kit (Colorimetric) Cat #P-9005 | EpiQuik m6A RNA Methylation Quantification Kit (Fluorometric) Cat #P-9008 | MethylFlash Urine N6-methyladenosine (m6A) Quantification Kit (Colorimetric) Cat# P-9015 | |
为的 | ELISA样检侧,系统设计吸光度的RNA化学发光法N6-甲基腺苷 | ELISA样检验,对于荧光参考值RNA中的N6-甲基腺苷 | ELISA样检则,特征提取消化法定假期量他们的尿液样件中RNA N6-甲基腺苷 |
最为关键的点 | 1. 检测任何物种中的m6A RNA甲基化 2. 使用m6A抗体的比色ELISA样测定 3. 检出限低至10 pg m6A | 1. 检测任何物种中的m6A RNA甲基化 2. 使用m6A抗体的荧光法测定 3. 检出限低至5 pg m6A | 1. 检测人类和动物尿液中的总尿m6A 水平 2. 使用m6A抗体的比色ELISA样测定 3. 检出限低至0.01 ng/assay well |
开始材质 | 总RNA | 总RNA | 排尿 |
最低标准输人量 | 50 pg | 50pg | 5ul |
总测时常 | < 4 hours | < 4 hours | < 4 hours |
反應数 | 48,96 | 48,96 | 48,96 |
的形式 | 96-Well Plate | 96-Well Plate | 96 strip-well |
&🌃nbsp; 【2】Epigenase m6A甲🐻基酶活性/抑制分析试剂盒
Epigenase m6A脱甲基酶活力性/仰制分享制剂盒(比色)cat# P-9013 | Epigenase m6A甲基化酶活力性/限制解析采血管盒(比色)cat# P-9019 | |
基本原则 | 用在特征取出吸光度的核取出物或纯化酶中总m6A去甲基酶催化活性/抑制性的量测 | 应用于立于吸光度的核取出物或纯化酶中总m6A甲基化酶生物/能够抑制的检测 |
关键性点 | 1. 检测多种物种中的m6A RNA去甲基化酶活性/抑制分析检测(哺乳动物,植物,真菌和细菌) 2. 使用m6A抗体的比色ELISA样测定 3. 检出限低至2ug 核提取物和50ng纯化的酶 | 1. 检测多种物种中的m6A RNA甲基化酶活性/抑制分析检测(哺乳动物,植物,真菌和细菌) 2. 使用m6A抗体的比色ELISA样测定 3. 检出限低至2ug 核提取物和50ng纯化的酶 |
起至的原材料 | 核提炼物和纯化的酶 | 核分离出来物以及纯化的酶 |
总测时限 | <5h | <4h |
类型 | 96-Well Plate | 96-Well Plate |
【3】m6A RNA甲基化抗体
货号 | 产商品编码称 | 使用 | 宿体来源地 | 不起作用性 |
A-1801 | N6-methyladenosine (m6A) Polyclonal Antibody | DB, ELISA, IF, IP, MeRIP | Rabbit | Broad Range, Human, Mouse |
A-1802 | N6-methyladenosine (m6A) Monoclonal Antibody [2H6] | DB, ELISA, IF, MeRIP, NucleotideArray | Rabbit | Broad Range, Human, Mouse, Rat |
🦂 图左:The N6-methyladenosine (m6A) Polyclonal Antibody tested in dot blot against total RNA of Arabidopsis
图右ELISA performed at1:1000 dilution usingN6ꦰ-methylad꧑enosine (m6A) Polyclonal Antibody
图左:The m6A rabbitꦗ monoclonal antibody was tested in Dot Blot a🅘gainst N6-methyladenosine (m6A) and unmodified adenosine.
&🐎nbsp; Oligomer 8 -ATAACTGG-m6ACCGAATGG
&nbsꦯp;&🐼nbsp; Oligomer 9 -ATAACTGGACCGAATGG
&𓂃nbsp; Oligomer 10 🎃-AAAAAAAAAAAAAAAAbiotin.
图右:U2OS cells pre-treated with BrdU were subjected to UVC irradiation incubated at 37 °C for the indicated time, and stained for N6-methyladenosine (m6A) Monoclonal Antibody. DAPI, 4&am🎀p;rsquo;, 6-diamidino-2-phenylindole. Global UVC irradiation exceed cytoplasmic level, peaking at 2 min after irradiation and diminishing over the following 8 min.
【4】MeRIP & m6A-seq欧宝体育官方
通过富集存在少量m6A的部分基因组来鉴定m6A修饰。 然后通过构建文库,为下一代测序准备这些片段。 欧宝体育官方 独特的方法称为CUT&RUN RNA m6A富集(在目标下切割,并使用核酸酶富集RNA m6A进行回收),仅在抗体结合位置分离RNA片段,同时在目标下捕获和切割。 这种简化的过程仅需几个小时即可将RNA提取到cDNA文库。
p-9018 EpiQuik CUT&RUN m6A RNA Enrichment Kit :基于🧔CUT&RUN的𝔉MeRIP可提高特异性和信号。
p-9016 EpiNext CUT&RUN RNA m6A-Sꦆeq Kit:基于CUT&RUN的一体式MeRIP和NGS库准备。
参考文献:
&💝nbsp; Ts❀uruta K. et. al. et. al. (September 2020). Biocheꦰmical and Biophysical Research Communications. 530(1) p-9005
♐ Zeng M et. al. (August 2020). 753:144810. p-9008
以上就是今天的全部内容了啦~~
下期预告:RNA甲基化——5mC甲基化,大家敬请期待噢~~
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