脂褐质由非常自发性荧光的脱色核膳食纤维和脂质粒子成分，以上粒子在老旧化策划 的溶酶体中累积。脂褐质粒子在用在荧光显微镜体检的大部分安全通道中产生鲜亮的荧光，并现在年令的延长在各种各样的策划 和策划 品类中1个。对此，在或者英语体内策划 或中老年人食草动物策划 中对特殊免役荧光电磁波实施激光散斑具体情况上是否可能的，除非说采用了办法来淬灭或修饰脂褐质荧光。   

今天给大家带来欧宝体育官方 代理品牌荧光领域领导者Biotium研发的TrueBlack脂褐素自体荧光淬灭剂(货号：23007)，可在用于免疫荧光染色的组织切片中淬灭脂褐素自发荧光。  

 TrueBlack的特点：

• 可消减脂褐质自发性荧光
• 避免源于非脂褐质因素的自行荧光
• 与Sudan Black B有差异，没有导致高背景图
• 可在抗体荧光着色前几天或后续用
• 处世类和老龄各种动物集体的荧光成相扫清了市政道路

 

TrueBlack淬灭脂褐质背景荧光效果比Sudan Black B更好

老式上，Sudan Black B已被在在天然免疫抗体阳性性荧光脱色后顺利通过用颜料孵育聚集切成片来淬灭脂褐素组织荧光。显然，也许它填补了脂褐质的组织荧光，但Sudan Black B还在继续颜色和远颜色安全通道中带来了平均的非非特异朋友图片背景图片荧光（图1），因此制约了一些光的波长中荧光颜料的实用。现今Biotium开拓了TrueBlack 作为一个Sudan Black B 的得天独厚代替品品。TrueBlack 可淬灭脂褐质荧光，而颜色/远颜色图片背景图片荧光的多要少得多（图1）。TrueBlack 除理能能在天然免疫抗体阳性性脱色前一天或以后做出。它很快、很简单，对荧光抗体阳性或核复染的无线信号导致最低，因此控制天然免疫抗体阳性性脱色的信噪比（图2-3）。

图1. 甲醇固定成人脑切片中的脂褐质自发荧光。在未经处理的组织（第一行）中，脂褐质以荧光颗粒的形式出现，在所有荧光通道中都发出荧光。苏丹黑 B（第二行）掩盖了脂褐质自发荧光，但在红色和远红色通道中引入了背景。TrueBlack（第三行）封闭了脂褐质，荧光背景增加最小。根据欧宝体育官方 Protocol，甲醇固定的成人大脑皮层冷冻切片未经处理或用 70%乙醇中的0.1% Sudan Black B或1X TrueBlack  染色。样品在蔡司LSM 700共聚焦显微镜的 FITC(绿色)、Cy3（红色）和 Cy5（远红色）通道中以相同的增益设置成像。

 

TrueBlack 处理可以在免疫荧光染色之前或之后进行:

图2. 免疫荧光染色前使用 TrueBlack 预处理淬灭脂褐质自发荧光。甲醛固定的人皮层冷冻切片未经处理 (A) 或用 TrueBlack (B) 处理，然后用 CF 488A 抗 NeuN 抗体偶联物（绿色）和 DAPI（蓝色）染色。在蔡司 LSM700 共聚焦显微镜上的所有通道中对切片进行成像。A. 脂褐质在所有通道中都发出明亮的荧光，在未经处理的组织的合并图像中显示为白点（红色箭头）。B. TrueBlack 预处理消除了脂褐质自发荧光，对特定染色的影响可以忽略不计。

图3. 免疫荧光染色后使用 TrueBlack 后处理淬灭脂褐质自发荧光。人大脑皮层的甲醇固定冷冻切片先用兔抗GFAP染色，然后用 CF 640R 山羊抗兔（货号: 20176）和DAPI（货号: 40009）染色。切片未经处理或用TrueBlack 处理，然后安装在 EverBrite 封固剂中（货号: 23001）。未处理的切片（左）除了GFAP免疫荧光（胶质突起，品红色）和DAPI染色(细胞核，蓝色)外，还显示出脂褐质自发荧光(白色箭头)。TrueBlack （右）消除了脂褐质荧光，同时为远红通道（品红色）和核复染（蓝色）中的 GFAP 免疫染色保持良好的信噪比。

 

TrueBlack 可以减少脂褐质以外来源的自发荧光

TrueBlack  还都能够提高来自于另外来历的自行荧光，列举鱼胶原血清酶、粘性血清酶、红体癌细胞系和基本背静荧光。它在淬灭那些自行荧光照角度不是对脂褐质管用，但它都能够优化人工历史和非人工历史策划 类形的背静（图4-5）。TrueBlack 还被适用于淬灭聚氨酯滤光片上的背静荧光，那些滤光片常被做为显像体癌细胞系记数的体癌细胞系大力支持物。

图4. TrueBlack  可减少FITC、Cy 3和Cy 5通道中人肾切片中的非脂褐质自发荧光。人肾冷冻切片在冰冷的甲醇中固定，细胞核用DAPI（蓝色）染色。自发荧光在Zeiss LSM 700 共聚焦显微镜上在所有通道中成像，两个样品的成像设置相同。底部：TrueBlack?处理。

图5. TrueBlack 可减少大鼠肾脏组织切片中 FITC 通道中的非脂褐质自发荧光。将大鼠肾冷冻切片固定在甲醛中，未经处理 (A) 或用TrueBlack (B)处理。细胞核用DAPI（蓝色）染色。FITC通道（绿色）中的自发荧光在Zeiss LSM700 共聚焦显微镜上对每个样品使用相同的成像设置进行成像。

 

TrueBlack  Plus：一种独特的脂褐质淬灭剂，远红背景低于原版 TrueBlack

Biotium 还开发了TrueBlack Plus（货号：23014），这是一种下一代脂褐素猝灭剂，其远红背景比原来的 TrueBlack（货号：23007）更低。TrueBlack Plus 也是唯一一种可用于水性缓冲液而非70% EtOH的脂✨褐素淬灭剂，可延长厚组织样品的孵育时间而不会收缩。 

用于WB和免疫荧光（IF）的背景淬灭剂：

处理专门用于免疫组化中脂褐素淬灭剂TrueBlack ，欧宝体育官方 还提供用于清除蛋白质印迹（WB）背景的TrueBlack WB Blocking Buffer Kit （货号：23013），以及用于阻断免疫荧光（IF）非特异性染色的TrueBlack IF Background Suppressor System (Permeabilizing) （23012）。  

相关欧宝体育官方 推荐：

货号	欧宝体育官方 名称
23007	TrueBlack Lipofuscin Autofluorescence Quencher, 20X in DMF
23014	TrueBlack Plus Lipofuscin Autofluorescence Quencher, 40X in DMSO
23002	EverBrite? Mounting Medium with DAPI
23003	EverBrite? Hardset Mounting Medium
23004	EverBrite? Hardset Mounting Medium with DAPI
23005	CoverGrip? Coverslip Sealant
23013	TrueBlack WB Blocking Buffer Kit
23012	TrueBlack IF Background Suppressor System (Permeabilizing)

        TrueBlack 相关引文赏析：

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