miRNA是许多人类病理学中有潜力的诊断和预后生物标志物，如何准确对miRNA进行定量呢？前期欧宝体育官方 介绍了免疫法定量miRNA的试剂盒，今天介绍常规基于PCR法的miRNA定量的试剂盒——双尾RT-qPCR。

传统microRNA PCR检测方法的痛点：用传统的PCR法检测microRNA的挑战在于，两个常规PCR引物的总长度几乎是microRNA长度的两倍，因此不适合于做miRNA的引物。以前的技术通过使用发夹引物延伸microRNA，添加poly A尾巴或通过连接添加片段来解决这个问题，但是这会降低检测的灵敏度和特异性。此外，这些方法无法检测在3'末端修饰的microRNA，因为它会干扰延伸过程。

 

目前市上边上较为常见的miRNA定量分析检验化学制剂盒的工作原理 

BioVendor专利欧宝体育官方 ——双尾RT-qPCR

欧宝体育官方 专属了的双尾RT-qPCR技巧，体现了独有的RT引物策略，与另外步骤比起，可可以提供出众的的灵巧度和非特异聊天。双尾RT-qPCR技巧已被研发使用在总的miRNA和piRNA的定量分析。 双尾RT-qPCR方式：与的适用一个组合测试测试测试探头有所差异，双尾PCR的适用两半测试测试测试探头，等食品各分为组合到有所差异的microRNA片断上，等片断依据折叠式的系链接连。而是每次半测试测试测试探头实际上都很短, 尚未组合到microRNA上，但当两半测试测试测试探头相辅相成时，等食品会一体化组合，种组合的非特异朋友不是常高的，毕竟在短半测试测试测试探头中错配的损害无比大。并且可不可以的适用两既定编码序列引物对建立的cDNA去PCR测序，用SYBR去在线检测。 

 

双尾RT-qPCR优势：

• 高精确度度（较多不超10个团伙）
• 高特喜欢的人
• 是和于很多种样表（血浆/血清，血渍，组织开展等）中的miRNA论文检测和化学发光法
• 确认折叠式的系链链接的两根半检测器（结合实际有所不同的microRNA场面）
• 动态的条件广（高达mg9 log）
• 在做单重qPCR前，可做双管各种方面RT-PCR
• 提供了高端定制化精准服务

 1.高敏感度及特女性朋友：

• 5?相互依存场面描写重要增长分析一下的机灵度：

 

• 5? 专一性片断可观提高了探测的特女性朋友：

 

5′-hemiprobe的特情人及灵巧度确认：为了更好地公测5′-hemiprobe对特情人的功劳，欧宝体育官方 有点了四种双尾RT引物区别Let-7 miRNA网络家族的好几个员工：Let-7a和Let-7f的技能，它是仅有处于miRNA编码字段学校的单一核苷酸的相互应响。RT 1引物的5'-hemiprobe定制方案成与let-7a的5'-末端前五个核苷酸构建， 而RT 2引物的5'-hemiprobe构建在let-7a的5个核苷酸上，能够种定制方案，区别let-7a和let-7f的核苷酸知识由RT 2引物的5′-hemiprobe的检侧的，而非由RT 1引物的检侧的。RT 2引物的5′-hemiprobe也很短（5个核苷酸），这是由于欧宝体育官方 会认为探头编码字段较间歇错配的应响会愈来愈凸显。仅仅的RT 1和RT 2引物编码字段还有所配的PCR引物是完整有所不一样的的。利用RT 2引物时，完整适配和错配的模版网站中间的ΔCq（ΔCq= 11.07）强势超过利用RT 1引物（ΔCq = 4.66），不含有5′-hemiprobe的有所不一样的碱基重重叠叠的RT 2引物，而非不含有RT 1引物的RT 2引物。这材料了5'-半探头对模式特情人的很大功劳。引起留意的是，四种双尾RT引物完整互补性的let-7a microRNA的Cq值一样 ，呈现即便5′-hemiprobe的间距有好几个碱基的有所不一样的，的检侧灵巧度还在继续有所不一样的。 2.采用样品类型、丰厚：

血浆/ 血清/ 尿液/ 脑脊液/ 生物液体	新鲜组织，冷冻／福尔马林固定组织的
细胞，外泌体

 3.miRNA按量的化学药品盒判断步骤简易：

相关联miRNA参考值的制剂盒欧宝体育官方 介绍：

欧宝体育官方 货号	欧宝体育官方 名称	品牌
RMR001R	miRNA Isolation Kit Cells-Exosomes	BioVendor
RMR002R	miRNA Isolation Kit Plasma-Serum	BioVendor
RMR003R	miRNA Isolation Kit FFPE	BioVendor
RMR004R	miRNA Isolation Kit Tissues	BioVendor
RDTTRT50	TT cDNA synthesis system - 50 rxns	BioVendor
RDTTPCR150	TT qPCR MasterMix - 150 rxns	BioVendor
RDTT000****PRI	TT assay primers (RT+qPCR) - 50+150 rxns	BioVendor
RDM00***	miREIA complex kit - 96 well format	BioVendor

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