作为欧宝体育官方:Biogradetech在中国区域的独家代理,欧宝体育官方 科技将为中国客户提供全面的Biogradetech欧宝体育官方 以及客户订制化服务。欢迎大家随时联系欧宝体育官方 。
欧宝体育官方 货号 | 英文名称 | 规格 | 保存条件 |
A-EXO005 | Insect cell culture medium, serum-free (suspension culture) 昆虫细胞无血清悬浮生长培养基 | 500mL/1000mL | 4℃避光保存 |
培养基使用方法
昆虫悬浮细胞培养环境
细胞培养条件:温度曲线:27℃±0.5℃、湿度曲线:70%±20%、无需CO2、120rpm(振幅:25)。培养过程中需注意以下三点:
1) 确保摇床24小时内常见高速运转; 2) 制止相互生态环境高温过高,致使致力于箱内情况高温无法控制; 3) 杜绝训练箱里水盘水少,导至训练箱里室内湿度过低。培养基适应
1.直接适应:最初培养阶段,Hi Five细胞按初始密度0.5×106cells/mL接种,SF9细胞按初始密度1.0×106cells/mL接种,直接将培养基更换为昆虫细胞无血清悬浮生长培养基 (A-EXO005) 进行培养。待细胞培养2-3代,且生长稳定后进行后续实验。Hi Five细胞稳定生长时按0.5×106cells/mL密度接种,SF9细胞稳定生长时按1.0×106cells/mL密度接种,培养72h后均可达到5-7×106 cells/mL,细胞活率≥90%。
2.间接适应:A-EXO005培养基与细胞原培养基1:1混合培养细胞,连续传2-3代,细胞稳定生长后可将培养基更换为A-EXO005培养基,再传2-3代,细胞生长稳定后进行后续实验。Hi Five细胞稳定生长时按0.5×106cells/mL密度接种,SF9细胞稳定生长时按1.0×106cells/mL密度接种,培养72h后均可达到5-7×106cells/mL,细胞活率≥90%。
3.注意装修细节装修细节: 3.1. 给出肿瘤细胞准确原因选取确定培养教育基会转变以及间接地转变。 3.2 内部驯化刚开始,若突然出现溶解度低、结团等不平衡情况,跟据溶解度抉择该用的传代的方法。 a.调制传代:随着上皮组织相对密度来计算传代时候需上皮组织悬液,避开一部分上皮组织悬液并补加优质致力于基。 b.离心力力传代:按照体受损组织细胞导热系数算起传代中所需体受损组织细胞悬液,800rpm(114g)离心力力5min,出掉上清,用新鲜毛肚培養基重悬体受损组织细胞。 4.上皮细胞没问题环境传代:细胞名称 | 接种密度 (cells/mL) | 第3天细胞密度 (cells/mL) | 细胞活率(%) | 细胞平均倍增时间(h) |
Hi Five | 0.5-0.8×106 | 5-7×106 | ≥90 | 24 |
SF9 | 0.8-1.2×106 |
各不相同记数行为概率会有对比分析,建立实用Countstar受损细胞记数仪。
昆虫悬浮细胞复苏:
升温培育基:取20mL的相当于培育基置入27℃升温,提高升温有效。将冻存管从液氮罐或-80℃家用冰箱中存入,速度快转回至37℃水浴中,高速摆动,终将全化掉。取提前预热好的致力于基5mL于灭菌离心法力式管上,并将解除冻结后的细胞核悬液移入此离心法力式管上。800rpm离心法力式5min(删去冻存液中DMSO)。离心式后弃去上清,用15mL加热好的提升基(维持较高组织膜高密度)重悬组织膜,移至有效摇瓶,放于提升箱中悬屏提升。昆虫悬浮细胞传代:
1.Hi Five上皮细胞恢复阶段传代:细胞复苏后前两代,如果细胞密度>2×106 cells/mL,取部分细胞悬液离心传代,按初始密度0.8×106 cells/mL接种;如果细胞密度≤2×106 cells/mL,进行全部离心换液(细胞刚复苏会有细胞碎片,属正常现象)。
2.SF9人体细胞溶栓阶段传代:复苏后2-3天取样计数,若细胞密度<2×106cells/mL以下,细胞不做任何处理,继续培养2-3天(复苏后4-6天),取样计数,若细胞密度2-5×106cells/mL,直接向摇瓶中加入新鲜培养基将细胞密度调整至1×106cells/mL左右,切忌不要离心传代,继续培养,若细胞密度>5×106cells/mL,可正常稀释传代。
3.Hi Five活細胞成长期传代:收到细胞后,将细胞转移至摇瓶中,取样计数并查看细胞状态,如果细胞密度>2×106 cells/mL,可以稀释传代,按0.8×106 cells/mL接种;如果细胞密度≤2×106 cells/mL,建议全部离心传代。(细胞经历运输过程会有细胞碎片,属正常现象)。
4.SF9活細胞时候传代:收到细胞后,将细胞转移至摇瓶中,取样计数并查看细胞状态,如果细胞密度≥5×106 cells/mL,可以稀释传代,按2×106 cells/mL接种;如果细胞密度<5×106 cells/mL,继续培养1-4天,此期间需每24h取样计数查看细胞状态,当细胞密度≥5×106 cells/mL,按2×106 cells/mL接种,稀释传代,直至细胞恢复正常状态后,按1×106 cells/mL接种。(细胞经历运输过程会有💝细胞碎片,属正常现象)。
昆虫悬浮细胞冻存:
1.待内部完全恢复至常规动态后,加大内部培养出来质量準備冻存建库。否则多建内部库,担保恢复备份不够。2.含血清冻存:选择处于对数生长期、活率>90%细胞进行冻存,冻存细胞密度:15-20×106cells/mL,推荐20×106 cells/mL。
无血清冻存:选择处于对数生长期、活率>90%细胞进行冻存,冻存细胞密度:30-40×106 cells/mL,推荐40×106 cells/mL。
3.准备工作冻存盒:向步骤升温盒吸取通常异丙醇,置入4℃冰箱冷藏预冷。4.含血清细胞冻存液配制:冻存液=40%新鲜培养基+50ಌ%FBS(建议使用进口胎牛血清)+10%DMSO,冻存液配好后置于4℃冰箱预冷。
无血清细胞冻存液配制:冻存液=45%新鲜培养基+45%细胞培养上清+10%DMSO,冻存液配好后置于4℃冰箱预冷。
冻存液调配时,先加致力于基多加血清或DMSO,放到DMSO溶液浓度过高使得血清更有效组成成分性变。
5.取上皮癌神经上皮细胞悬液,800rpm离心法5min,弃去上清,用有益健康上皮癌神经上皮细胞冻存液重悬上皮癌神经上皮细胞,进行调节上皮癌神经上皮细胞体积至指标值。6.尽快散装肿瘤细胞液至冻存管内。7.将冻存管放在流程温度下降盒中,放于-80℃洗衣机,24h后转到液氮罐中储藏。一段段时后新生儿复苏测量。微信营销扫描二维码在线上人工服务